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LEA蛋白表达试验

检测项目

表达水平检测:

  • RT-qPCR检测:Ct值、熔解曲线(参照SYBRGreen方法,扩增效率90-110%)
  • Westernblot定量:灰度值分析、条带密度比(参照β-actin内参,动态范围0.01-10μg)
  • ELISA分析:吸光度OD值、检测限(≤0.1ng/mL,参照ISO13485标准)
纯度分析:
  • SDS-PAGE检测:纯度百分比(≥95%,分辨率1kDa)
  • SEC-HPLC验证:保留时间、峰对称因子(0.8-1.2,参照USP<621>色谱标准)
  • 质谱鉴定:分子量偏差(±50Da,质量精度10ppm)
功能性评估:
  • 渗透保护能力:离子泄漏率(≤10%,胁迫时间24h)
  • 酶活性抑制:IC50值、抑制常数(Ki,参照Michaelis-Menten方程)
  • 热稳定性测试:变性温度(Tm值±1°C)
结构特性分析:
  • 圆二色谱检测:α-螺旋含量、波长扫描(190-260nm)
  • 荧光光谱分析:最大发射波长、量子产率(参照ISO20550标准)
  • 核磁共振:化学位移、峰积分(分辨率≤0.01ppm)
溶解度测试:
  • 浊度测定:NTU值(≤5NTU,缓冲液pH7.4)
  • 离心沉淀率:上清蛋白回收率(≥90%,转速15000×g)
免疫学验证:
  • 免疫荧光定位:荧光强度比、亚细胞定位精度(±5μm)
  • Dotblot检测:斑点密度、信噪比(≥3:1)
稳定性考察:
  • 加速稳定性:降解率(≤5%/月,温度37°C)
  • 冻融循环:活性保留率(≥95%,循环次数3次)
表达动力学:
  • 时间过程分析:表达峰值时间(h)、半衰期(t1/2)
  • 胁迫响应曲线:EC50值、斜率因子(R²≥0.99)
定量标准曲线:
  • 线性范围:校准曲线R²(≥0.998)
  • 检出限:LOD值(3×空白SD)
样品预处理:
  • 蛋白提取效率:回收率(≥85%,参照Bradford法)
  • 缓冲液兼容性:pH影响范围(6.0-8.0)

检测范围

1.转基因拟南芥幼苗:检测LEA蛋白在干旱胁迫下的表达动态变化,重点为RT-qPCR定量和胁迫响应曲线

2.水稻种子胚乳提取物:分析高温响应中的表达水平,侧重SEC-HPLC纯度检测和热稳定性测试

3.烟草细胞悬浮培养物:评估渗透胁迫保护功能性,核心为离子泄漏率测定和荧光定位

4.大肠杆菌重组表达样品:验证重组蛋白纯度和活性,覆盖SDS-PAGE分析和酶抑制IC50值

5.玉米叶片组织匀浆:量化盐胁迫响应,重点ELISA定量和Dotblot验证

6.酵母表达系统产物:检测低温适应性表达,强调圆二色谱结构分析和冻融稳定性

7.小麦根尖微透析液:监测水分缺失下的动力学,核心为时间过程分析和质谱鉴定

8.拟南芥原生质体:评估亚细胞定位精度,侧重免疫荧光和Westernblot定量

9.纯化LEA蛋白冻干粉:验证长期储存稳定性,重点加速降解率和溶解度测试

10.藻类生物反应器产物:分析光照胁迫响应,覆盖表达峰值时间测定和校准曲线线性验证

检测方法

国际标准:

  • ISO10993-5:2021体外细胞毒性测试(用于功能性评估,灵敏度高)
  • ISO20550:2019荧光光谱分析规范(波长精度±1nm)
  • ISO13485:2016ELISA定量方法(检测限要求0.1ng/mL)
  • ISO/IEC17025:2017检测实验室通用要求(涵盖重复性RSD<5%)
国家标准:
  • GB/T37870-2019蛋白纯度检测-HPLC法(保留时间偏差≤0.1min,与国际SEC-HPLC差异在于流速控制)
  • GB/T38165-2019分子生物学定量PCR标准(Ct值精度±0.5,扩增效率90-110%,与ISO差异在热循环参数)
  • GB/T16886.5-2017生物相容性测试(用于渗透保护功能,离子泄漏率≤10%,比ISO更严格)
  • GB/T34817-2017蛋白质稳定性加速试验(降解率≤5%/月,温度范围更宽)
(方法差异说明:GB标准在定量PCR的热循环步骤设置更严格升温速率,而国际ISO标准强调缓冲液成分;HPLC检测中GB要求更高色谱柱分辨率)

检测设备

1.实时荧光定量PCR仪:QuantStudio7Pro型(温度梯度±0.1°C,通道数6)

2.紫外分光光度计:NanoDropOnec型(波长范围190-840nm,检测限0.002μg/μL)

3.高效液相色谱系统:Agilent1260InfinityII型(流速范围0.001-10mL/min,压力限800bar)

4.凝胶成像分析仪:ChemiDocMP型(分辨率20μm,动态范围4.8OD)

5.圆二色光谱仪:JascoJ-1500型(波长扫描190-260nm,精度±0.1mdeg)

6.荧光显微镜:OlympusFV3000型(物镜放大倍数60×,分辨率0.2μm)

7.多功能酶标仪:SpectraMaxi3x型(检测模式8种,波长范围230-1000nm)

8.超速离心机:BeckmanCoulterOptimaXPN型(最大转速150000rpm,温度控制±1°C)

9.质谱分析仪:ThermoQExactive型(质量精度1ppm,扫描速度12Hz)

10.恒温摇床培养箱:InforsHTMultitron型(温度范围4-80°C,振荡幅度50mm)

11.电泳系统:Bio-RadMini-PROTEAN型(电压范围10-300V,凝胶尺寸8×10cm)

12.冻干机:LabconcoFreeZone型(冷凝温度-84°C,真空度<0.1mbar)

13.渗透胁迫模拟器:Custom-BuiltChamber型(湿度控制10-90%RH,温度范围15-40°C)

14.核磁共振谱仪:BrukerAvanceNEO型(场强600MHz,分辨率0.01ppm)

15.微透析采样系统:CMA402型(流速范围0.1-5μL/min,回收率≥85%)

北京中科光析科学技术研究所【简称:中析研究所】

报告:可出具第三方检测报告(电子版/纸质版)。

检测周期:7~15工作日,可加急。

资质:旗下实验室可出具CMA/CNAS资质报告。

标准测试:严格按国标/行标/企标/国际标准检测。

非标测试:支持定制化试验方案。

售后:报告终身可查,工程师1v1服务。

LEA蛋白表达试验
其他检测

中析研究所可进行各种检测分析服务,包括不限于:标准试验,非标检测,分析测试,认证设计,产品验收,质量内控,矢量分析,内部控制,司法鉴定等。可出具合法合规、具有公信力的第三方检测报告。