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姜黄DNA分子鉴定

检测项目

DNA提取与纯化:

  • DNA浓度测定:ng/μl范围(参照ISO21571:2005)
  • DNA纯度评估:A260/A280比值(1.7-2.0),A260/A230比值(≥1.8)
  • 完整性检测:凝胶电泳条带清晰度(无降解痕迹)
PCR扩增:
  • 引物特异性验证:退火温度梯度(50-65°C)
  • 扩增效率检测:Ct值(≤30,参照SYBRGreen方法)
  • 产物大小确认:bp长度范围(100-500bp)
DNA测序分析:
  • 序列读长:平均长度≥200bp
  • 错误率控制:<0.1%碱基错误
  • 覆盖深度:≥30×全基因组覆盖
序列比对:
  • 相似度计算:序列一致性百分比(≥98%)
  • 变异位点检测:SNP/InDel识别(参照NCBI数据库)
  • 进化树构建:聚类分析置信度(bootstrap值≥70)
物种鉴定:
  • 目标基因检测:matK或JianCe区域扩增(阳性对照)
  • 掺假识别:外源DNA筛查(阈值<0.5%)
  • 遗传多样性分析:单倍型频率计算
定量分析:
  • qPCR定量:拷贝数检测(动态范围10^2-10^7)
  • 相对表达水平:ΔΔCt法计算(参照MIQE指南)
  • 标准曲线线性:R^2≥0.99
生物信息学处理:
  • 序列组装:contigN50长度(≥1000bp)
  • 注释准确性:功能基因匹配率(≥95%)
  • 数据库比对:BLASTE值(≤1e-5)
质量控制:
  • 重复性检测:RSD≤5%
  • 阳性/阴性对照:符合率100%
  • 环境干扰排除:无污染信号(Ct值>35)
稳定性测试:
  • DNA保存稳定性:-80°C下保持完整(≥6个月)
  • 试剂批次一致性:批次间变异系数(CV≤3%)
  • 温度影响评估:热循环耐受性(25-40°C)
报告生成:
  • 数据可视化:序列图谱清晰度(分辨率≥300dpi)
  • 结果验证:双盲测试符合率(≥99%)
  • 标准化输出:格式符合ISO/IEC17025

检测范围

1.新鲜姜黄根茎:重点检测DNA提取效率和新鲜度,防止降解影响PCR扩增

2.干姜黄粉末:侧重DNA纯化过程优化,评估研磨导致的片段化程度

3.姜黄提取物:核心检测溶剂残留干扰,确保DNA无化学变性

4.姜黄保健品:强调掺假识别,筛查添加淀粉或其他植物DNA

5.姜黄精油:重点检测痕量DNA提取,评估低浓度样本的扩增可行性

6.姜黄发酵产品:侧重微生物DNA干扰排除,确保纯物种鉴定

7.姜黄种子:检测遗传一致性,验证育种纯度

8.姜黄制品包装:评估环境DNA污染控制,如塑料或纸纤维影响

9.姜黄药材:重点检测传统炮制过程中的DNA稳定性

10.姜黄基因工程样品:侧重转基因事件检测,识别特定插入序列

检测方法

国际标准:

  • ISO21571:2005食品分子生物学分析方法
  • ISO5725-2:2019测量方法与结果的准确度
  • ISO/IEC17025:2017检测和校准实验室能力通用要求
国家标准:
  • GB/T19495.3-2004转基因植物检测第3部分:核酸提取
  • GB/T30988-2014植物品种真实性分子检测方法
  • GB/T35825-2018中药材DNA条形码分子鉴定方法通则
方法差异说明:ISO标准通常要求更高的DNA纯度阈值(A260/A230≥2.0),而GB标准优化了提取缓冲液配方以降低成本;在PCR扩增中,ISO强调热循环仪校准,GB则规定特定引物浓度范围;测序分析时,ISO采用Illumina平台默认参数,GB偏向Sanger测序验证步骤。

检测设备

1.紫外分光光度计:NanoDropOneC(检测范围2-15000ng/μl,波长190-840nm)

2.PCR仪:Veriti96-WellThermalCycler(温度范围4-99°C,精度±0.1°C)

3.凝胶电泳系统:Bio-RadPowerPacBasic(电压范围5-300V,凝胶浓度0.8-2%)

4.台式离心机:Eppendorf5424R(转速100-15000rpm,最大RCF21400×g)

5.实时荧光定量PCR仪:QuantStudio5(通道数6,检测限1copy/μl)

6.DNA测序仪:MiSeq(读长2×300bp,通量15Gb/run)

7.生物分析仪:Agilent2100(片段大小检测范围25-12000bp,分辨率1bp)

8.冷冻离心机:ThermoScientificSorvallST16(温度范围-20°C至40°C,容量6×250ml)

9.核酸提取工作站:KingFisherFlex(通量24-96样本/批,提取时间<60min)

10.恒温混匀仪:EppendorfThermoMixerC(温度范围-10°C至100°C,振荡速度300-1400rpm)

11.超低温冰箱:HaierDW-86L928(温度范围-86°C,容积928L)

12.纯水系统:Milli-QIntegral(产水电阻率18.2MΩ·cm,流量2L/min)

13.生物安全柜:EscoAC2-4S1(洁净等级ClassII,风速0.38m/s)

14.微量分光光度计:DeNovixDS-11(样品体积0.5-2μl,检测精度±1%)

15.电泳成像系统:GelDocEZ(分辨率5.0MP,曝光时间0.1-60s)

北京中科光析科学技术研究所【简称:中析研究所】

报告:可出具第三方检测报告(电子版/纸质版)。

检测周期:7~15工作日,可加急。

资质:旗下实验室可出具CMA/CNAS资质报告。

标准测试:严格按国标/行标/企标/国际标准检测。

非标测试:支持定制化试验方案。

售后:报告终身可查,工程师1v1服务。

姜黄DNA分子鉴定
其他检测

中析研究所可进行各种检测分析服务,包括不限于:标准试验,非标检测,分析测试,认证设计,产品验收,质量内控,矢量分析,内部控制,司法鉴定等。可出具合法合规、具有公信力的第三方检测报告。