信号通路活性测试
检测项目
细胞增殖检测:
- 增殖率检测:细胞活力≥80%,倍增时间(≤24h,参照ISO10993-5)
- 细胞周期分析:G1/S/G2/M比例(标准偏差<5%)
- 克隆形成能力:克隆形成率(≥30%)
- 磷酸化水平:AKT磷酸化(foldchange≥2),ERK活化(浓度范围0.1-10ng/mL)
- 信号分子表达:β-catenin表达量(相对定量±10%)
- 磷酸化位点验证:酪氨酸磷酸化(阳性对照响应率>90%)
- mRNA表达量:RT-qPCRCt值(ΔΔCt法,变异系数<15%)
- 基因突变筛查:突变频率(检出限0.1%)
- 启动子活性:荧光素酶报告基因(RLU值≥10^5)
- 早期凋亡率:AnnexinV阳性率(5-20%)
- caspase活性:Caspase-3活性(单位≥2U/mg)
- 晚期凋亡指标:PI染色阳性率(≤5%)
- IC50值:50%抑制浓度(精度±0.1μM)
- EC50值:50%有效浓度(响应曲线R^2≥0.95)
- 选择性指数:靶点特异性(IC50比值≥10)
- 迁移率:划痕愈合率(mm/h,标准误差<10%)
- 侵袭指数:Transwell穿透细胞数(≥100细胞/孔)
- 基质降解能力:明胶酶活性(吸光度变化≥0.2)
- IL-6浓度:ELISA定量(检测范围1-1000pg/mL)
- TNF-α水平:多重检测(回收率90-110%)
- 趋化因子表达:CXCL12浓度(灵敏度0.5pg/mL)
- 结合亲和力:Kd值(nM级,误差<10%)
- 受体占有率:配体结合率(≥70%)
- 内化效率:荧光标记内化率(时间依赖曲线)
- Z'因子:筛选质量指数(>0.5)
- hit率:阳性率(≥1%)
- 信号噪声比:背景信号抑制(S/N≥3)
- NF-κB活化:核转位指数(荧光强度比≥1.5)
- Wnt通路活性:β-catenin核积聚(定量评分≥2)
- JAK-STAT磷酸化:STAT3磷酸化(WesternBlot灰度值)
检测范围
1.肿瘤细胞系:涵盖HeLa、MCF-7等常用株系,检测重点为增殖通路异常和凋亡抵抗机制。
2.免疫细胞样本:包括T细胞、巨噬细胞等,侧重细胞因子信号传导和免疫应答活性。
3.组织样本:新鲜或石蜡包埋组织,检测原位信号分子表达和通路空间分布。
4.药物候选物:小分子化合物库,筛查信号通路抑制效能和毒性效应。
5.生物标志物样本:血清、血浆等体液,量化循环信号因子如细胞因子水平。
6.干细胞样本:胚胎或多能干细胞,检测分化相关通路如Wnt或Notch活性。
7.微生物样本:细菌或真菌培养物,评估群体感应通路和毒力因子调控。
8.植物样本:叶片或根组织,检测激素信号如生长素响应通路。
9.动物模型样本:小鼠或大鼠组织,侧重在体信号通路激活和疾病模型验证。
10.临床样本:患者活检或血液,聚焦疾病相关通路如癌症或炎症标志物。
检测方法
国际标准:
- ISO10993-5:医疗器械生物评价-细胞毒性试验
- CLSIEP17-A2:免疫检测方法性能评价
- ICHQ2(R1):分析方法验证技术要求
- GB/T37864-2019:生物样本中基因表达检测方法
- GB/T35538-2017:细胞凋亡检测技术规范
- GB/T34801-2017:蛋白磷酸化定量分析方法
检测设备
1.流式细胞仪:FACSCantoII(流速范围0.5-60μL/min,检测通道12个)
2.实时荧光定量PCR仪:QuantStudio5(温度精度±0.1°C,检测孔数96)
3.酶标仪:SynergyH1(吸光度范围0-4OD,波长精度±1nm)
4.WesternBlot系统:Mini-PROTEANTetra(电泳电压10-300V,转膜效率>90%)
5.细胞计数器:CountessII(计数精度99%,样本体积20μL)
6.倒置显微镜:AxioObserver(放大倍数40-100x,分辨率0.22μm)
7.液相色谱-质谱联用仪:1290-6495(质量范围50-2000m/z,分辨率>10,000)
8.高速离心机:Centrifuge5424(转速范围300-15000rpm,容量24x1.5mL)
9.CO2培养箱:Heraeus(温度控制±0.5°C,CO2浓度5%)
10.微量移液器:Researchplus(体积范围0.1-1000μL,精度±0.5%)
11.电泳设备:PowerPacBasic(输出电压10-500V,电流1A)
12.紫外可见分光光度计:NanoDropOne(波长范围190-840nm,光程0.2mm)
13.细胞培养箱:CO2Incubator(湿度控制90%,温度稳定性±0.2°C)
14.冷冻离心机:SorvallST16R(温度范围-20至40°C,最大离心力25000xg)
15.高通量筛选系统:EnVision(检测速度>1s/孔,孔板兼容性384孔)
北京中科光析科学技术研究所【简称:中析研究所】
报告:可出具第三方检测报告(电子版/纸质版)。
检测周期:7~15工作日,可加急。
资质:旗下实验室可出具CMA/CNAS资质报告。
标准测试:严格按国标/行标/企标/国际标准检测。
非标测试:支持定制化试验方案。
售后:报告终身可查,工程师1v1服务。