检测项目

细胞存活与凋亡检测：

• 细胞存活率：MTT法检测OD值（490nm），计算存活细胞百分比（±5%）
• 凋亡细胞比例：AnnexinV/PI双染流式细胞术，早期凋亡细胞（AnnexinV+/PI-）比例（%）
• caspase-3活性：荧光底物法检测相对荧光强度（RFU），活性变化倍数（≥2倍视为显著激活）

• 收缩幅度：视频追踪系统测量心肌细胞缩短百分比（%，参照ISO10993-12）
• 收缩频率：实时记录心肌细胞搏动次数（次/分钟，变异系数≤10%）
• 舒张末期长度：图像处理软件测量细胞舒张状态下的长度（μm，误差±1μm）

• 动作电位时程：膜片钳技术记录APD90（ms），变化幅度（±10ms视为异常）
• 心率变异性：心电图分析SDNN（ms），数值降低提示自主神经功能紊乱
• 心律失常发生率：监测室性早搏、室速等异常节律次数（次/小时）

• 乳酸脱氢酶（LDH）释放率：比色法检测培养液中LDH活性（U/L），计算释放率（%，≥20%视为细胞损伤）
• ATP含量：荧光素酶法检测细胞内ATP浓度（μmol/g蛋白，误差±0.1μmol/g）
• 线粒体膜电位：JC-1染色荧光显微镜观察，红/绿荧光强度比（≤1.0视为线粒体功能障碍）

• 活性氧（ROS）水平：DCFH-DA染色荧光分光光度计检测荧光强度（RFU），升高倍数（≥1.5倍视为氧化应激激活）
• 超氧化物歧化酶（SOD）活性：黄嘌呤氧化酶法检测U/mg蛋白，活性降低百分比（≤80%视为抗氧化能力下降）
• 丙二醛（MDA）含量：硫代巴比妥酸法检测nmol/mg蛋白，含量增加倍数（≥2倍视为脂质过氧化增强）

• 肌纤维排列完整性：α-actin免疫荧光染色，荧光显微镜下评分（1-5级，≤3级视为排列紊乱）
• 线粒体形态：透射电镜观察嵴完整性，评级（1-4级，≥3级视为线粒体损伤）
• 细胞核形态：DAPI染色荧光显微镜观察，核固缩、碎裂细胞比例（%）

• L型钙通道电流（ICa-L）：膜片钳技术记录电流密度（pA/pF），抑制率（≥30%视为通道阻断）
• 钠通道电流（INa）：电压钳技术记录峰值电流（pA/pF），激活/失活曲线偏移（≥10mV视为异常）
• 钾通道电流（IK1）：稳态电流密度（pA/pF），变化幅度（±20%视为通道功能改变）

• 肌钙蛋白I（cTnI）浓度：ELISA法检测培养液中cTnI含量（pg/mL），≥0.1ng/mL视为心肌细胞损伤
• 脑钠肽（BNP）水平：化学发光法检测血浆BNP浓度（ng/L），≥100ng/L视为心功能不全
• 白细胞介素-6（IL-6）分泌量：流式细胞术CBA法检测（pg/mL），升高倍数（≥5倍视为炎症反应激活）

• 细胞内药物浓度：LC-MS/MS法检测（μg/mg蛋白），浓度-时间曲线下面积（AUC）
• 药物代谢产物鉴定：质谱碎片分析（m/z），保留时间匹配（±0.1min）
• 代谢清除率：计算药物在细胞内的清除速率（μL/min/mg蛋白），误差±0.05μL/min/mg

• 胞内游离钙浓度（[Ca2+]i）：Fura-2AM染色荧光比值法（340/380nm），浓度变化（nmol/L）
• 钙瞬变幅度：荧光显微镜记录ΔF/F0（%），降低幅度（≥30%视为钙稳态失衡）
• 钙泵活性（SERCA2a）：ATP水解速率法检测（nmolPi/min/mg蛋白），活性降低（≤50%视为功能障碍）

• 呼吸链复合物活性：分光光度法检测复合物I（NADH-泛醌还原酶）活性（nmol/min/mg蛋白）
• ATP合成速率：荧光素酶法检测（pmolATP/s/mg蛋白），速率降低（≥40%视为合成障碍）
• 线粒体膜通透性转换孔（MPTP）开放：钙诱导荧光法检测荧光强度变化（%），开放率（≥30%视为线粒体损伤）

检测范围

1.化学药物：涵盖小分子心血管药物（如β受体阻滞剂、钙通道拮抗剂）、抗肿瘤药物（如蒽环类抗生素），重点检测药物浓度依赖性心肌细胞损伤及代谢产物的毒性协同作用

2.生物制品：包括重组蛋白药物（如胰岛素、生长激素）、单克隆抗体（如抗PD-1抗体），侧重评估免疫原性介导的心肌炎症反应及细胞因子风暴

3.中药提取物：涉及复方中药浸膏（如丹参滴丸提取物、黄芪注射液）、单一活性成分（如人参皂苷Rg3），关注多成分协同或拮抗作用导致的心肌细胞功能异常

4.疫苗：涵盖新冠病毒疫苗（灭活疫苗、mRNA疫苗）、流感疫苗，重点检测接种后心肌细胞炎症因子（如IL-6、TNF-α）分泌及电生理异常

5.化妆品原料：包括美白成分（如氢醌衍生物、维生素C衍生物）、防腐剂（如parabens、甲醛释放体），检测经皮吸收后药物对心肌细胞的蓄积性毒性

6.农药：涉及有机磷杀虫剂（如敌敌畏、乐果）、除草剂（如草甘膦、百草枯），评估急性暴露后心肌细胞电生理紊乱（如心律失常）及细胞凋亡

7.食品添加剂：包括人工甜味剂（如阿斯巴甜、三氯蔗糖）、防腐剂（如亚硝酸盐、山梨酸钾），重点检测长期低剂量暴露导致的心肌细胞代谢损伤（如ATP合成减少）

8.环境污染物：涵盖重金属（如铅、镉、汞）、多环芳烃（如苯并芘、荧蒽），检测蓄积性重金属对心肌细胞的氧化应激损伤及线粒体功能障碍

9.医疗器械相关材料：包括心脏支架涂层材料（如紫杉醇洗脱涂层、生物可吸收聚合物）、人工心脏瓣膜材料（如聚氨酯、钛合金），重点评估降解产物对心肌细胞的毒性作用

10.天然毒素：涉及黄曲霉毒素B1、河豚毒素、毒蕈碱，检测急性中毒后心肌细胞坏死（如LDH释放增加）及电生理异常（如动作电位时程延长）

检测方法

国际标准：

• OECDTG423急性经口毒性试验（固定剂量法）：规定了药物急性毒性的初步筛选方法，用于评估药物对心肌细胞的急性损伤潜力
• ISO10993-5:2009医疗器械生物学评价第5部分：体外细胞毒性试验：明确了MTT法、LDH释放法等细胞毒性检测的标准操作流程
• ICHS7B人用药物安全性评价指导原则：推荐膜片钳技术用于评估药物对心肌离子通道（如hERG通道）的影响，预测药物致心律失常风险
• ASTME1464-13流式细胞术检测细胞凋亡标准指南：规范了AnnexinV/PI双染法检测凋亡细胞的操作步骤及结果分析

• GB/T21767-2008化学品急性经口毒性试验固定剂量法：与OECDTG423的差异在于动物种属优先选择SD大鼠，而非小鼠，适用于国内化学品的急性毒性评价
• GB/T16886.5-2017医疗器械生物学评价第5部分：体外细胞毒性试验：与ISO10993-5的差异在于阳性对照物使用二甲基亚砜（DMSO），而非苯酚，更符合国内实验室常规操作
• YY/T0606.1-2014医用电气设备第1部分：安全通用要求：规定了心肌细胞电生理检测设备（如膜片钳系统）的电气安全要求，确保试验过程中的设备稳定性
• GB/T23263-2009植物提取物抗氧化活性测定清除DPPH自由基法：适用于中药提取物抗氧化活性的检测，补充了国际标准中关于天然产物毒性评价的方法

检测设备

1.离体心脏灌流系统：Langendorff灌流装置（恒压灌流模式，灌流压力范围0-100mmHg，误差±2mmHg）

2.心肌细胞电生理记录系统：MultiChannelSystemsMEA2100（微电极阵列，60个电极，采样率10kHz，分辨率12位）

3.流式细胞仪：BDFACSVerse（4个荧光检测通道，激发波长488nm、633nm，最小检测颗粒0.5μm）

4.荧光分光光度计：HitachiF-7000（激发波长范围200-700nm，发射波长范围200-900nm，分辨率1nm）

5.高效液相色谱-质谱联用仪：Agilent1290InfinityII/6470（超高效液相色谱，色谱柱C181.8μm2.1×100mm；质谱仪三重四极杆，质量范围50-1200m/z，分辨率100000）

6.倒置荧光显微镜：LeicaDMi8（放大倍数10x-63x，相位差及微分干涉contrast功能，荧光滤镜组488nm/525nm、555nm/610nm）

7.酶标仪：TecanInfiniteM200Pro（光栅型酶标仪，检测波长200-1000nm，灵敏度0.001OD，动态范围4.0OD）

8.细胞培养箱：ThermoScientificCO2Incubator（直接加热式，CO2浓度5%±0.1%，温度37℃±0.1℃，相对湿度≥95%）

9.超速离心机：BeckmanCoulterOptimaL-100XP（钛合金转子，最大转速100000rpm，最大离心力806000xg，温度控制4℃±0.5℃）

10.实时定量PCR仪：AppliedBiosystemsQuantStudio5（6个荧光检测通道，支持TaqMan和SYBRGreen检测，采样率10次/秒）

11.WesternBlot系统：Bio-RadChemiDocXRS+（化学发光检测，灵敏度pg级，动态范围5个数量级，支持多色荧光检测）

12.激光共聚焦显微镜：ZeissLSM880（共聚焦扫描，激光波长405nm、488nm、561nm、633nm，分辨率120nm，扫描速度8帧/秒）

13.全自动生化分析仪：RocheCobas8000（模块化设计，检测项目包括LDH、SOD、MDA，周转时间15分钟/样本，重复性CV≤2%）

14.动物心电图机：ECG-6511（12导联同步记录，采样率1000Hz，分辨率12位，支持心率变异性分析）

15.低温高速离心机：Eppendorf5430R（不锈钢转子，最大转速14000rpm，最大离心力20817xg，温度控制4℃±0.5℃）

北京中科光析科学技术研究所【简称：中析研究所】

报告：可出具第三方检测报告(电子版/纸质版)。

检测周期：7~15工作日，可加急。

资质：旗下实验室可出具CMA/CNAS资质报告。

标准测试：严格按国标/行标/企标/国际标准检测。

非标测试：支持定制化试验方案。

售后：报告终身可查，工程师1v1服务。