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沉降菌金黄色葡萄球菌筛查检测

检测项目

采样方法:

  • 沉降时间设定:标准沉降时间4h(参照ISO14698-1)
  • 采样点布置:根据房间面积计算点位数量(≥5点/100m²)
  • 沉降板规格:90mm直径无菌培养皿(材质聚苯乙烯)
培养基准备:
  • 选择性培养基:Baird-Parker琼脂配方(卵黄亚碲酸钾添加)
  • 培养基灭菌:高压蒸汽121°C,15min(参照GB4789.28)
  • 培养基pH值:7.0-7.4(偏差±0.2)
培养条件:
  • 培养温度:37°C±1°C(恒温控制)
  • 培养时间:48h±2h(需避光)
  • 湿度控制:相对湿度≥90%(防止干燥)
菌落观察:
  • 典型菌落特征:黑色凸起、周围透明圈(直径1-2mm)
  • 菌落计数:手动计数范围10-150CFU/板(参照ISO6888-1)
  • 菌落确认率:≥95%典型形态比例
生化鉴定:
  • 凝固酶试验:试管法阳性反应(血浆凝固时间≤4h)
  • 过氧化氢酶测试:气泡产生阳性(参照APIStaph)
  • 葡萄糖发酵:产酸产气阳性(pH≤6.5)
分子检测:
  • PCR检测:nuc基因扩增(引物序列5'-GCGATTGATGGTGATACGGTT-3')
  • 检测限:10CFU/mL(灵敏度≥95%)
  • 电泳确认:100bp条带出现(凝胶浓度2%)
药敏测试:
  • 抗生素敏感性:苯唑西林MIC值≤2μg/mL(参照CLSIM100)
  • 耐药性筛查:mecA基因检测阳性(PCR方法)
  • 抑菌圈直径:≥15mm为敏感(纸片扩散法)
毒素检测:
  • 肠毒素筛查:ELISA方法(检测限1ng/mL)
  • TSST-1检测:免疫印迹阳性(参照FDABAM)
  • 毒素活性:兔回肠结扎试验阳性
质量控制:
  • 阳性对照:ATCC25923菌株生长(CFU≥100)
  • 阴性对照:无菌生理盐水无生长
  • 精密度控制:RSD≤10%(重复三次)
数据报告:
  • 浓度计算:CFU/m³(公式:CFU/板×1000/沉降时间)
  • 检出限报告:<1CFU/m³为未检出
  • 不确定度:±15%(覆盖因子k=2)

检测范围

1.空气样品:监测洁净室、手术室等环境的空气沉降菌,重点检测金黄色葡萄球菌浓度是否超标(限值≤5CFU/m³)。

2.表面擦拭样品:对医疗器械、工作台面进行擦拭采样,检测表面污染程度,重点为接触点金黄色葡萄球菌残留量。

3.水样品:包括饮用水、工业循环水,检测水中沉降菌含量,重点为耐氯菌株筛查。

4.食品样品:涵盖乳制品、肉类等,检测加工环境沉降菌,重点为肠毒素产生风险。

5.药品样品:无菌制剂生产区空气,重点检测金黄色葡萄球菌污染对药品安全的影响。

6.化妆品样品:生产车间环境,重点检测沉降菌对产品微生物限值的贡献。

7.生物实验室样品:细胞培养区空气,重点为生物安全柜沉降菌监控。

8.工业环境样品:食品工厂、制药车间,重点检测设备表面沉降菌积累。

9.医疗废物处理区:废弃物暂存间空气,重点为耐药菌株筛查。

10.公共场所样品:学校、商场通风系统,重点检测沉降菌浓度与通风效率关联。

检测方法

国际标准:

  • ISO14698-1:2003生物污染控制-沉降菌法(规定沉降时间4h)
  • ISO6888-1:2021食品和动物饲料微生物学-金黄色葡萄球菌计数方法(使用Baird-Parker琼脂)
  • ISO22964:2017微生物学-分子检测方法(PCR扩增条件差异:退火温度55°C)
国家标准:
  • GB15982-2012医院消毒卫生标准(要求沉降时间1h)
  • GB4789.10-2016食品安全国家标准食品微生物学检验金黄色葡萄球菌检验(培养基pH范围7.2-7.4)
  • GB/T18204.3-2013公共场所卫生检验方法第3部分:空气微生物(沉降菌计算差异:CFU/皿直接报告)
(方法差异说明:ISO标准沉降时间4h,GB标准沉降时间1h;ISOPCR退火温度55°C,GB方法退火温度52°C)

检测设备

1.沉降采样器:MAS-100型(流量28.3L/min,精度±5%)

2.恒温培养箱:MemmertIN260型(温度范围0-70°C,波动±0.5°C)

3.生物安全柜:EscoAirstream型(洁净度Class100,风速0.5m/s)

4.倒置显微镜:OlympusIX73型(放大倍数40-400X,分辨率0.1μm)

5.PCR仪:Bio-RadT100型(温控精度±0.1°C,循环数40)

6.电泳仪:TanonEPS300型(电压范围0-300V,电流0-400mA)

7.离心机:Eppendorf5424R型(转速0-15000rpm,容量24×1.5mL)

8.酶标仪:ThermoMultiskanGO型(波长范围340-850nm,精度±1%)

9.生化鉴定系统:VITEK2Compact型(检测卡类型GP,时间4-8h)

10.恒温水浴锅:JulaboSW22型(温度范围-20-150°C,波动±0.1°C)

11.分光光度计:ShimadzuUV-1900型(波长精度±0.3nm,带宽1nm)

12.灭菌器:Tuttnauer3870型(压力0.22MPa,温度134°C)

13.菌落计数器:Scan1200型(计数范围1-1000CFU,误差±3%)

14.振荡培养箱:InforsHTMultitron型(转速0-300rpm,容量100L)

15.冷冻干燥机:ChristAlpha1-4型(真空度0.1mbar,温度-50°C)

北京中科光析科学技术研究所【简称:中析研究所】

报告:可出具第三方检测报告(电子版/纸质版)。

检测周期:7~15工作日,可加急。

资质:旗下实验室可出具CMA/CNAS资质报告。

标准测试:严格按国标/行标/企标/国际标准检测。

非标测试:支持定制化试验方案。

售后:报告终身可查,工程师1v1服务。

沉降菌金黄色葡萄球菌筛查检测
其他检测

中析研究所可进行各种检测分析服务,包括不限于:标准试验,非标检测,分析测试,认证设计,产品验收,质量内控,矢量分析,内部控制,司法鉴定等。可出具合法合规、具有公信力的第三方检测报告。