心脏灌流心肌细胞糖基化蛋白分析
检测项目
糖基化定量检测:
- AGEs浓度测定:荧光强度单位(FIU,参照ISO15194)、吸光度值(OD370nm)
- 糖基化血红蛋白检测:HbA1c含量百分比(≥6.5%诊断阈值)
- 总糖基化蛋白含量:微克每毫克蛋白(μg/mg)
- 糖基化位点定位:质谱峰强度、位点覆盖率百分比(%)
- 蛋白质折叠稳定性:热变性温度(Tm,℃)、自由能变化(ΔG,kJ/mol)
- 心肌细胞收缩力:收缩幅度百分比(%)、频率(次/分)
- 膜流动性检测:荧光偏振值(FP)、各向异性系数
- 葡萄糖摄取率:纳摩尔每分钟(nmol/min)
- 乳酸生成量:毫摩尔每升(mmol/L)
- 活性氧水平:荧光探针强度(RFU)
- 抗氧化酶活性:超氧化物歧化酶单位(U/mg蛋白)
- TNF-α含量:皮克每毫升(pg/mL)
- IL-6表达量:相对mRNA倍数变化
- 糖基化相关基因:RAGE表达量(相对倍数)、GLUT1转录水平
- 凋亡率:AnnexinV阳性细胞百分比(%)
- 活力指数:MTT吸光度值(OD570nm)
- AMPK磷酸化水平:Westernblot信号强度
- NF-κB核移位:荧光显微镜评分(0-4级)
- 动作电位时程:毫秒(ms)
- 钙瞬变幅度:相对荧光单位(RFU)
检测范围
1.原代大鼠心肌细胞:灌流培养模型,重点检测AGEs积累及收缩功能异常
2.人心肌细胞系(如H9c2):标准体外模型,侧重糖基化蛋白在缺氧复氧损伤中的变化
3.诱导多能干细胞分化心肌细胞:长期灌流体系,评估糖基化位点修饰与细胞老化关联
4.心脏组织切片:冰冻或石蜡包埋样本,检测区域糖基化蛋白分布及炎症浸润
5.离体心脏灌流系统:Langendorff装置,分析整体心肌糖基化水平与电生理稳定性
6.心肌细胞培养基:含高糖条件液体,监测溶解性糖基化产物浓度
7.动物模型心脏组织:糖尿病大鼠心肌,侧重氧化应激标志物与糖基化关联
8.心脏活检样本:临床来源组织,检测特异性糖基化蛋白诊断价值
9.糖基化修饰标准蛋白:BSA或胶原蛋白参照品,验证检测方法准确性
10.心肌细胞裂解液:蛋白质提取物,分析糖基化程度与代谢通路激活
检测方法
国际标准:
- ISO15194:2009体外诊断参考物质描述(样本前处理规范)
- ASTME308-17荧光光谱法标准规程(激发波长设定差异)
- ISO10993-5:2009细胞毒性试验方法(活力检测参数偏差)
- IEC62304:2006医疗软件生命周期要求(数据分析软件合规性)
- GB/T27404-2008实验室质量控制规范(重复性标准差异)
- GB/T5750-2023生活饮用水标准检验方法(基质干扰处理对比)
- GB/T16886-2011医疗器械生物学评价(细胞培养条件限定)
- GB/T27417-2017合格评定化学分析方法确认(灵敏度阈值区分)
检测设备
1.荧光分光光度计:HITACHIF-7000(波长范围200-900nm,分辨率0.1nm)
2.液相色谱-质谱联用仪:Agilent6495C(质量精度1ppm,流速0.2-2.0mL/min)
3.酶标仪:ThermoMultiskanGO(波长范围340-850nm,精度±0.5%)
4.流式细胞仪:BDFACSCantoII(激光波长488nm/640nm,检测通道14个)
5.实时PCR仪:RocheLightCycler480(温控范围4-99℃,升降温速率4.5℃/s)
6.显微成像系统:OlympusIX83(物镜放大倍数4×-100×,CCD分辨率5MP)
7.细胞电生理记录仪:AxonMultiClamp700B(采样率100kHz,阻抗范围1MΩ-100MΩ)
8.离心机:Eppendorf5424R(转速范围100-15000rpm,温度控制4-40℃)
9.恒温培养箱:MemmertINCO108(温度范围5-50℃,CO2控制0-20%)
10.蛋白质电泳系统:Bio-RadMini-PROTEANTetra(电压范围10-300V,凝胶尺寸8×10cm)
11.紫外分光光度计:ShimadzuUV-2600(波长范围190-1100nm,带宽1nm)
12.振荡培养器:INFORSHTMultitron(转速范围20-300rpm,温度一致性±0.2℃)
13.冷冻干燥机:CHRISTAlpha1-4LDplus(冷凝温度-55℃,真空度0.1mbar)
14.电化学分析仪:MetrohmAutolabPGSTAT204(电位范围±10V,电流分辨率1pA)
15.恒温水浴锅:JulaboCorioCD(温度范围-20-150℃,精度±0.01℃)
北京中科光析科学技术研究所【简称:中析研究所】
报告:可出具第三方检测报告(电子版/纸质版)。
检测周期:7~15工作日,可加急。
资质:旗下实验室可出具CMA/CNAS资质报告。
标准测试:严格按国标/行标/企标/国际标准检测。
非标测试:支持定制化试验方案。
售后:报告终身可查,工程师1v1服务。