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有益菌落总数平板计数实验

因您的需求、实验方案、检测样品、测试过程不同,相应的参考标准请咨询在线工程师!

文章概述:有益菌落总数平板计数实验定量测定样品中特定有益微生物活菌数量。核心对象为乳杆菌属、双歧杆菌属等目标益生菌。采用倾注或涂布法,关键项目包括梯度稀释精度(10⁻¹至10⁻⁶)、选择性培养基适用性验证(如MRS琼脂)、厌氧/微需氧培养条件控制(36±1℃,48-72h)及典型菌落形态鉴别(菌落直径≥0.5mm,边缘整齐)。结果以CFU/g(mL)报告,检测限≥10CFU。

检测项目

样品预处理:

  • 均质处理:均质转速12000rpm±5%(参照ISO6887-1)
  • 稀释液验证:缓冲蛋白胨水pH7.2±0.2,渗透压300±15mOsm/kg
梯度稀释:
  • 稀释度梯度:10⁻¹至10⁻⁶(连续稀释误差≤5%)
  • 移液精度:移液器校准误差≤1μL(ISO8655-2)
培养基制备:
  • 选择性琼脂:MRS琼脂灭菌后pH6.2±0.2(适用乳杆菌)
  • 培养基性能:目标菌回收率≥70%(参照ISO11133)
平板接种:
  • 涂布体积:0.1mL±0.02mL(GB4789.2附录B)
  • 倾注温度:琼脂冷却至46℃±1℃
培养控制:
  • 温度稳定性:36±0.5℃(ANSI/NSF49认证)
  • 气体环境:厌氧罐氧浓度≤0.1%(ISO15213)
菌落计数:
  • 计数阈值:30-300CFU/平板(FDABAMChap.3)
  • 形态确认:革兰氏染色阳性率≥95%(ISO19344)
数据计算:
  • 结果修约:<100CFU保留整数,≥100CFU两位有效数字
  • 不确定度:扩展不确定度≤0.35log₁₀CFU(EURACHEL指南)
干扰消除:
  • 抑制剂中和:胆盐浓度0.15%±0.02%(针对肠道样品)
  • 竞争菌抑制:叠氮化钠添加量0.03g/L(ISO15214)
质控验证:
  • 阳性对照:植物乳杆菌ATCC8014回收率80-120%
  • 阴性对照:无菌平板零生长(ISO7218)
设备校准:
  • 培养箱验证:温度均匀性±0.3℃(NIST可溯源)
  • 天平精度:±0.001g(量程0-220g)

检测范围

1.发酵乳制品:酸奶、酸奶油等,重点检测保加利亚乳杆菌与嗜热链球菌比例

2.益生菌制剂:冻干菌粉/胶囊,侧重活菌稳定性及包埋率验证

3.婴幼儿配方食品:添加双歧杆菌产品,需检测阪崎肠杆菌干扰

4.发酵植物基产品:豆乳发酵制品,检测植物乳杆菌特异性生长

5.保健食品:片剂/口服液,关注肠球菌属选择性计数

6.发酵肉制品:萨拉米香肠等,检测清酒乳杆菌耐盐性

7.饲料添加剂:枯草芽孢杆菌制剂,验证孢子萌发率

8.化妆品原料:发酵产物滤液,需排除杂菌污染

9.药品原料:益生菌原菌种,符合USP<2022>无菌要求

10.环境样本:发酵车间拭子,监控设备表面菌群定植

检测方法

国际标准:

  • ISO19344:2015发酵乳制品中乳酸菌计数(IDF220)
  • ISO15214:1998食品微生物学-厌氧菌平板计数法
  • FDABAMChapter3:酸奶中乳酸菌检测
国家标准:
  • GB4789.35-2022食品微生物学检验乳酸菌检验
  • GB/T4789.34-2023双歧杆菌检验
  • SN/T5364.8-2021出口益生菌产品检测规程
方法差异说明:ISO标准要求双层平板法提高厌氧环境完整性,GB方法允许单层倾注但需延长培养时间至72h;FDABAM规定双歧杆菌检测须补充半胱氨酸-HCl溶液,而ISO方法采用预还原培养基。

检测设备

1.无菌均质器:BagMixer400型(拍击速度8次/秒,均质袋爆破强度≥50N)

2.程控稀释仪:Dilumate8400(梯度稀释误差≤1%,交叉污染率<0.1%)

3.自动涂布机:EddyJet2(涂布半径误差≤0.5mm,速度可调5-60rpm)

4.厌氧培养系统:WhitleyA35(氧浓度监测精度0.01%,CO₂调控范围5-15%)

5.恒温培养箱:MemmertIPP260(温度波动±0.2℃,独立三区校准)

6.菌落计数器:Scan500(分辨率4μm,误判率<0.5%)

7.微生物鉴定仪:VITEKMS(质谱检测范围200-2000Da)

8.PCR仪:QuantStudio7(控温速率6℃/秒,孔间温差±0.2℃)

9.生物安全柜:EscoAirstream4(下降风速0.33±0.015m/s,HEPA过滤效率99.999%)

10.移液器校准仪:SartoriusCubisMCA(测量范围1μL‑10mL,精度±0.1%)

11.pH计:MettlerToledoSevenExcellence(分辨率0.001pH,自动温度补偿)

12.超纯水系统:Milli-QIQ7003(电阻率18.2MΩ·cm,TOC≤1ppb)

13.培养基分装器:Sterilmixer300(分装精度±1mL/min,温度保持46±0.5℃)

14.菌落成像系统:ProtoCOL3(RGB三色LED光源,600dpi分辨率)

15.厌氧指示剂:AnaeroGen2.5L(氧吸收率>99.9%,有效期24个月)

北京中科光析科学技术研究所【简称:中析研究所】

报告:可出具第三方检测报告(电子版/纸质版)。

检测周期:7~15工作日,可加急。

资质:旗下实验室可出具CMA/CNAS资质报告。

标准测试:严格按国标/行标/企标/国际标准检测。

非标测试:支持定制化试验方案。

售后:报告终身可查,工程师1v1服务。

有益菌落总数平板计数实验
中析研究所

北京中科光析科学技术研究所(简称中析研究所),隶属于北京前沿科学技术研究院,为集体所有制单位,是以科研检测为主的科学技术研究机构。中析研究所坚持基础研究与应用研究并重、应用研究和技术转化相结合,发展为以“任务带学科”为主要特色的综合性研究所。经国家有关部门批准,成为第三方分析测试技术服务单位,旗下实验室机构获得CMA资质认证。开展了研发设计、分析检测、试验验证、共性加工、信息及知识产权等服务,为科技型企业创新提供公共服务。本所得到政府创新基金的支持,被评为国家高新技术企业。

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