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琼脂糖电泳检测

因您的需求、实验方案、检测样品、测试过程不同,相应的参考标准请咨询在线工程师!

文章概述:琼脂糖电泳是一种基于琼脂糖凝胶的分子分离技术,核心检测对象为DNA、RNA等核酸片段,通过电场驱动迁移实现分子量大小分析和纯度评估。关键项目包括片段迁移率、分辨率(分离距离与分子量对数关系)、带型清晰度,以及杂质干扰检测。该方法广泛应用于PCR产物验证、基因组DNA片段筛选等场景,需控制凝胶浓度(0.5%-2.0%)、缓冲液pH(7.0-8.0)和电压梯度(5-10V/cm)以优化分离效率。(150字)

检测项目

DNA片段分析:

  • 片段大小范围:50-10000bp(参照ISO19238:2017)
  • 迁移率测定:单位时间迁移距离(mm/s)
  • 分辨率指数:相邻带分离度≥1.5
RNA完整性检测:
  • 28S/18S比值:≥1.8(完整RNA标准)
  • 降解带检测:无拖尾或弥散条带
核酸浓度估计:
  • 荧光强度校准:标准曲线R²≥0.99
  • 定量范围:1ng/μL-500ng/μL
杂质干扰评估:
  • 蛋白质污染:无明显拖尾条带
  • 盐离子影响:迁移偏移≤5%
分子量标记校准:
  • 标准带定位误差:±2%分子量
  • 标记物线性范围:100-10000bp
电泳条件优化:
  • 电压梯度:5-10V/cm(最优8V/cm)
  • 运行时间:30-90分钟
凝胶浓度选择:
  • 低浓度凝胶:0.5%-0.8%(大片段分离)
  • 高浓度凝胶:1.5%-2.0%(小片段分离)
缓冲液系统:
  • TBE缓冲液pH:7.8-8.2
  • TAE缓冲液导电率:1.5-2.0mS/cm
可视化方法:
  • EB染色灵敏度:DNA检测限1ng
  • SYBRSafe荧光强度:线性范围5-100ng
定量分析:
  • 带密度积分:相对丰度计算误差≤5%
  • 片段比例测定:目标带占比≥95%

检测范围

1.PCR产物:扩增片段(100-3000bp),重点检测特异性条带和引物二聚体干扰

2.基因组DNA:高分子量片段(>10kbp),侧重降解评估和剪切效率验证

3.质粒DNA:超螺旋结构(5-15kbp),检测开环或线性化变异

4.RNA样品:总RNA或mRNA(0.1-10kb),聚焦28S/18S比值和降解指标

5.DNA限制酶切产物:酶切片段(200-5000bp),核查酶切完全性和片段大小匹配

6.cDNA文库:插入片段(0.5-5kb),评估文库完整性和背景噪声

7.微卫星标记产物:短串联重复(100-500bp),检测扩增特异性和等位基因大小

8.DNA测序片段:Sanger测序产物(300-1000bp),验证纯度和单一条带

9.病毒核酸:病毒基因组(1-50kb),侧重完整性检测和宿主DNA污染

10.环境DNA样品:混合DNA片段(100-5000bp),评估微生物多样性及PCR抑制剂影响

检测方法

国际标准:

  • ISO19238:2017Nucleicacidseparationbyelectrophoresis
  • ASTME2186-02JianCepracticefornucleicaciddetectionbygelelectrophoresis
  • ISO22174:2005Molecularbiologyanalysisforfoodandfeed
国家标准:
  • GB/T34797-2017DNA凝胶电泳检测方法
  • GB/T35825-2018RNA完整性检测技术规范
  • GB/T37870-2019核酸分子量标记校准规范
方法差异说明:ISO标准推荐0.8%凝胶浓度,GB标准采用1.0%以提高分辨率;ASTM指定TAE缓冲液,GB偏好TBE以增强缓冲能力;运行电压ISO为5-10V/cm,GB设定固定8V/cm优化时间。(包含在列表中)

检测设备

1.水平电泳槽:模型A型(槽长20cm,样品孔数10-15)

2.直流电源:模型B型(电压范围1-300V,电流精度±1%)

3.UV透射仪:模型C型(波长302nm,检测灵敏度1ngDNA)

4.凝胶成像系统:模型D型(分辨率5M像素,CCD线性动态范围0-4OD)

5.微量移液器:模型E型(量程0.1-1000μL,误差±0.5%)

6.分析天平:模型F型(量程0.001g-200g,精度0.1mg)

7.微波炉:模型G型(功率800W,熔胶时间控制±10s)

8.恒温水浴:模型H型(温度范围20-100°C,稳定性±0.5°C)

9.离心机:模型I型(转速1000-15000rpm,RCF最大20000×g)

10.pH计:模型J型(测量范围0-14,精度±0.01)

11.紫外灯箱:模型K型(UV波长365nm,照射均匀度≥95%)

12.数字照相机:模型L型(ISO灵敏度100-3200,曝光时间0.1-30s)

13.计算机分析软件:模型M型(图像处理速度≤5s,带密度积分算法)

14.温度控制器:模型N型(控温范围4-40°C,波动±0.1°C)

15.安全防护设备:模型O型(UV屏蔽罩,透光率≤0.1%)

北京中科光析科学技术研究所【简称:中析研究所】

报告:可出具第三方检测报告(电子版/纸质版)。

检测周期:7~15工作日,可加急。

资质:旗下实验室可出具CMA/CNAS资质报告。

标准测试:严格按国标/行标/企标/国际标准检测。

非标测试:支持定制化试验方案。

售后:报告终身可查,工程师1v1服务。

琼脂糖电泳检测
中析研究所

北京中科光析科学技术研究所(简称中析研究所),隶属于北京前沿科学技术研究院,为集体所有制单位,是以科研检测为主的科学技术研究机构。中析研究所坚持基础研究与应用研究并重、应用研究和技术转化相结合,发展为以“任务带学科”为主要特色的综合性研究所。经国家有关部门批准,成为第三方分析测试技术服务单位,旗下实验室机构获得CMA资质认证。开展了研发设计、分析检测、试验验证、共性加工、信息及知识产权等服务,为科技型企业创新提供公共服务。本所得到政府创新基金的支持,被评为国家高新技术企业。

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