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沙门氏菌检验

因您的需求、实验方案、检测样品、测试过程不同,相应的参考标准请咨询在线工程师!

文章概述:沙门氏菌检验是针对沙门氏菌属(Salmonellaspp.)病原微生物的系统检测过程,核心检测对象包括食品、环境及生物样本中的沙门氏菌存在。关键项目涵盖预增菌活化、选择性分离培养、生化特性鉴定及血清学分型,检测限要求≤1CFU/25g,确保灵敏度≥95%和特异性≥99%。检验过程严格遵循无菌操作,重点监控生长曲线、抗生素敏感性和毒力基因表达,以评估样本污染风险和质量控制指标。

检测项目

样本处理检测:

  • 预增菌处理:孵化时间24±2小时(温度37±1℃),缓冲蛋白胨水(BPW)培养基参照ISO6579
  • 均质化处理:均质速度2000rpm±100rpm,样本重量25g±0.1g
增菌培养检测:
  • 选择性增菌:RVS肉汤孵化48小时(41.5±0.5℃),检测沙门氏菌生长密度≥10^6CFU/mL
  • 二次增菌:MKTTn肉汤培养24小时(37±1℃),pH范围6.8-7.2
分离培养检测:
  • 平板划线:XLD琼脂孵化24小时(37±1℃),典型菌落直径1-2mm,黑色中心特征
  • 显色培养基:SMID2琼脂培养24小时(37±1℃),紫色菌落识别率≥98%
生化鉴定检测:
  • 糖发酵试验:乳糖阴性、蔗糖阳性(参照API20E系统)
  • 酶活性测试:赖氨酸脱羧酶阳性、硫化氢产生阳性
血清学分型检测:
  • O抗原鉴定:玻片凝集试验,阳性率≥99.5%
  • H抗原分型:试管凝集法,覆盖血清型≥2500种
分子生物学检测:
  • PCR扩增:invA基因检测(灵敏度≥95%),循环数35±2
  • 实时荧光PCR:检测限≤10拷贝/反应,特异性≥99%
抗生素敏感性检测:
  • 药敏试验:氨苄西林耐药性判定(抑菌圈直径≤13mm),参照CLSIM100
  • MIC测定:最小抑菌浓度值(μg/mL),范围0.25-512
毒力因子检测:
  • 毒力基因PCR:spvB、sopB基因阳性率≥90%
  • 细胞侵袭试验:HeLa细胞侵袭率≥50%
定量分析检测:
  • MPN计数:最大可能数法,检测下限≤3MPN/g
  • 活菌计数:平板计数法,精度±0.5logCFU/mL
质量控制检测:
  • 阳性对照:沙门氏菌ATCC14028株生长阳性
  • 阴性对照:无菌样本无生长,交叉污染率≤1%

检测范围

1.肉类及禽制品:包括生鲜鸡肉、牛肉等,重点检测屠宰加工环节的沙门氏菌污染,采样点涵盖表面和内部组织。

2.蛋制品:鲜蛋、液蛋等,检测重点为蛋壳表面和内容物的沙门氏菌侵入,关注肠炎沙门氏菌高发风险。

3.奶制品:原料奶、奶酪等,侧重巴氏杀菌后残留检测,监控pH和温度对细菌存活影响。

4.水样:饮用水、废水等,核心检测沙门氏菌浓度≤1CFU/100mL,重点评估过滤浓缩方法的回收率。

5.环境表面:食品加工设备、工作台面等,通过拭子采样,检测重点为生物膜形成和消毒剂残留影响。

6.饲料:动物饲料原料及成品,监控沙门氏菌污染源,重点检测水分含量≤14%环境下的细菌增殖。

7.即食食品:沙拉、熟食等,检测即食环节的二次污染,核心关注预包装样本的厌氧菌检测。

8.水果蔬菜:鲜切果蔬、预包装产品,侧重灌溉水污染检测,重点评估表面冲洗效率。

9.医疗器械:内窥镜、导管等,检测生物负载,核心监控灭菌后残留沙门氏菌。

10.动物粪便:养殖场样本,重点筛查沙门氏菌携带率,评估交叉污染风险。

检测方法

国际标准:

  • ISO6579-1:2017食品和饲料中沙门氏菌检测方法(基于增菌和分离培养)
  • ISO/TS6579-2:2017实时PCR法检测沙门氏菌(分子生物学替代方法)
国家标准:
  • GB4789.4-2016食品微生物学检验沙门氏菌检验(采用三阶段增菌流程)
  • GB/T5750.12-2006生活饮用水标准检验方法微生物指标(包含沙门氏菌MPN法)
方法差异说明:ISO标准采用RVS肉汤为主增菌,而GB标准优先使用TTB肉汤;分子检测中ISO推荐实时PCR,GB则兼容传统PCR;培养温度设置ISO为41.5℃,GB为37℃,影响生长速率。

检测设备

1.恒温培养箱:MemmertINC108型(温度范围0-70℃,精度±0.1℃,容量200L)

2.生物安全柜:ESCOA2型(风速0.45m/s±0.05m/s,HEPA过滤效率99.99%)

3.PCR扩增仪:Bio-RadT100型(热循环速度5℃/秒,温度均匀性±0.5℃)

4.实时荧光PCR仪:AppliedBiosystems7500型(检测通道6个,灵敏度≤10拷贝)

5.自动微生物鉴定仪:VITEK2Compact型(鉴定速度≤8小时,数据库≥500菌种)

6.显微镜:OlympusCX43型(放大倍数40-1000X,分辨率0.2μm)

7.离心机:Eppendorf5810R型(转速100-15000rpm,容量4×100mL)

8.均质器:BagMixer400型(拍打速度8次/秒,处理量400mL)

9.电泳仪:Bio-RadPowerPacBasic型(电压10-300V,电流400mA)

10.菌落计数器:Scan500型(自动识别精度±1%,计数范围0-5000CFU)

11.厌氧培养罐:OxoidAnaeroGen型(氧气消耗率≤1%in30min,容量2.5L)

12.pH计:MettlerToledoSevenExcellence型(测量范围0-14,精度±0.01)

13.自动移液器:EppendorfResearchplus型(体积范围0.1-1000μL,误差≤1%)

14.光谱仪:用于培养基质量控制,波长范围200-800nm(分辨率1nm)

15.高压灭菌器:SystecVX-150型(温度121℃,压力0.22MPa,灭菌时间≥15min)

北京中科光析科学技术研究所【简称:中析研究所】

报告:可出具第三方检测报告(电子版/纸质版)。

检测周期:7~15工作日,可加急。

资质:旗下实验室可出具CMA/CNAS资质报告。

标准测试:严格按国标/行标/企标/国际标准检测。

非标测试:支持定制化试验方案。

售后:报告终身可查,工程师1v1服务。

沙门氏菌检验
中析研究所

北京中科光析科学技术研究所(简称中析研究所),隶属于北京前沿科学技术研究院,为集体所有制单位,是以科研检测为主的科学技术研究机构。中析研究所坚持基础研究与应用研究并重、应用研究和技术转化相结合,发展为以“任务带学科”为主要特色的综合性研究所。经国家有关部门批准,成为第三方分析测试技术服务单位,旗下实验室机构获得CMA资质认证。开展了研发设计、分析检测、试验验证、共性加工、信息及知识产权等服务,为科技型企业创新提供公共服务。本所得到政府创新基金的支持,被评为国家高新技术企业。

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