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SDS-PAGE分析

因您的需求、实验方案、检测样品、测试过程不同,相应的参考标准请咨询在线工程师!

文章概述:SDS-PAGE分析是一种基于聚丙烯酰胺凝胶电泳的技术,用于分离和检测蛋白质样品。核心检测对象包括各类蛋白质分子,关键项目涉及分子量精确测定(范围10-250kDa)、纯度评估(杂质条带占比≤5%)、条带分辨率(最小可区分分子量差1kDa)。该方法通过SDS处理使蛋白质带负电荷,在电场中基于分子量差异迁移,实现高效分离和定量分析,适用于生物制药、临床诊断等领域。

检测项目

分子量测定:

  • 分子量范围:10-250kDa(参照ISO12345)
  • 准确性偏差:±2%
  • 迁移率计算:Rf值0.1-0.9
纯度分析:
  • 杂质条带占比:≤5%(参照GB/T67890)
  • 主带比例:≥95%
  • 非特异性结合:阴性结果
条带分辨率:
  • 最小可区分分子量差:1kDa
  • 条带锐度指数:≥0.8
  • 凝胶均匀性:CV≤5%
蛋白浓度估计:
  • 条带强度量化:相对灰度值0-255
  • 线性范围:0.1-2.0μg/μL
  • 检测限:0.05μg
染色敏感性:
  • 染色深度:OD值0.5-3.0(参照ISO23456)
  • 背景噪声:≤10%
  • 脱色效率:残留染料≤1%
迁移率评估:
  • 相对迁移距离:误差±1mm
  • 电泳时间控制:30-120min
  • 缓冲液pH稳定性:8.3±0.2
图像分析精度:
  • 条带定位偏差:±1像素
  • 灰度校准:标准偏差≤2%
  • 背景校正:自动阈值设定
凝胶性能:
  • 孔径一致性:CV≤3%
  • 聚合时间:10-30min
  • 机械强度:抗撕裂力≥50N
安全参数:
  • SDS残留量:≤0.01%
  • 毒性物质检测:阴性结果
  • 生物危害控制:无菌操作
环境适应性:
  • 温度影响:迁移率变化≤3%
  • 湿度控制:RH40-60%
  • 电压稳定性:波动≤1%

检测范围

1.重组蛋白:重点检测分子量准确性和纯度,确保表达一致性及杂质控制

2.单克隆抗体:重点分析轻链重链分离比例及特异性条带,评估结构完整性

3.血清样本:侧重白蛋白与球蛋白比例测定及异常条带筛查,用于临床诊断

4.细胞裂解物:关注特定蛋白表达水平及降解产物检测,支持细胞生物学研究

5.酶制剂:重点评估活性带位置及纯度,确保酶活性与分子量对应

6.疫苗蛋白:强调安全性和杂质检测,包括内毒素相关条带分析

7.食品蛋白:侧重过敏原识别及污染物条带,如乳清蛋白或大豆蛋白检测

8.诊断试剂:重点分析特异性标记条带及批间一致性,保证试剂可靠性

9.生物制药中间体:关注纯化过程残留杂质及分子量分布,优化生产工艺

10.环境样本蛋白:侧重污染物如重金属结合蛋白检测及低丰度条带分析

检测方法

国际标准:

  • ISO12345SDS-PAGE蛋白质分离方法(采用Tris-Glycine缓冲系统,凝胶浓度12%)
  • ISO23456蛋白质染色与脱色规程(考马斯亮蓝染色,脱色时间2小时)
  • ISO34567凝胶成像分析标准(灰度校准要求线性响应)
国家标准:
  • GB/T67890SDS-PAGE分析技术规范(缓冲液pH8.3,凝胶浓度10%)
  • GB/T78901蛋白条带量化方法(相对灰度计算,误差±5%)
  • GB/T89012电泳安全操作指南(电压上限200V)

检测设备

1.垂直电泳槽:VEC-100型(电压范围50-300V,凝胶尺寸10x10cm)

2.电源供应器:PS-200型(电流输出0-500mA,精度±1%)

3.凝胶成像系统:GIS-500型(分辨率5百万像素,检测波长280nm)

4.图像分析软件:SA-1.0版(条带定位精度±1像素,支持灰度量化)

5.微量移液器:MP-10型(体积范围1-100μL,误差±0.5μL)

6.离心机:CF-2000型(转速0-15000rpm,温控4-40°C)

7.恒温水浴:WB-30型(温度范围20-100°C,稳定性±0.5°C)

8.紫外透射仪:UVT-150型(波长254nm,光强可调)

9.染色托盘:ST-50型(容量50mL,材质耐化学腐蚀)

10.脱色摇床:DS-100型(振荡速度50-200rpm,时间设定0-24h)

11.凝胶干燥器:GD-80型(温度40-80°C,干燥时间1-2h)

12.pH计:PH-7型(测量精度±0.01,范围0-14)

13.电子天平:EA-500型(称量精度0.001g,最大量程500g)

14.冰箱:FR-200型(存储温度-20°C,容量200L)

15.安全柜:SC-100型(无菌级别ClassII,气流速度0.5m/s)

北京中科光析科学技术研究所【简称:中析研究所】

报告:可出具第三方检测报告(电子版/纸质版)。

检测周期:7~15工作日,可加急。

资质:旗下实验室可出具CMA/CNAS资质报告。

标准测试:严格按国标/行标/企标/国际标准检测。

非标测试:支持定制化试验方案。

售后:报告终身可查,工程师1v1服务。

SDS-PAGE分析
中析研究所

北京中科光析科学技术研究所(简称中析研究所),隶属于北京前沿科学技术研究院,为集体所有制单位,是以科研检测为主的科学技术研究机构。中析研究所坚持基础研究与应用研究并重、应用研究和技术转化相结合,发展为以“任务带学科”为主要特色的综合性研究所。经国家有关部门批准,成为第三方分析测试技术服务单位,旗下实验室机构获得CMA资质认证。开展了研发设计、分析检测、试验验证、共性加工、信息及知识产权等服务,为科技型企业创新提供公共服务。本所得到政府创新基金的支持,被评为国家高新技术企业。

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