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心脏灌流自由基清除能力分析

因您的需求、实验方案、检测样品、测试过程不同,相应的参考标准请咨询在线工程师!

文章概述:心脏灌流自由基清除能力分析是评估心肌组织在灌流条件下对抗氧化应激损伤的关键技术。核心检测对象为离体心脏模型或心肌细胞悬液中的活性氧清除效率,重点量化超氧化物歧化酶催化速率、谷胱甘肽过氧化物酶活性单位及丙二醛生成量等参数,通过动态监测羟自由基清除率与总抗氧化能力评价心肌保护机制。

检测项目

抗氧化酶活性检测:

  • SOD酶活力:抑制率≥70%(参照ISO21427-1)
  • GSH-Px活力:酶活性单位≥35U/mgprot
  • CAT酶动力学:Km值≤50mM,Vmax≥100μmol/min/mg
氧化损伤产物检测:
  • MDA含量:浓度≤3.5nmol/mgprot(TBARS法)
  • 蛋白质羰基化:羰基含量≤5nmol/mgprot
  • 8-OHdG定量:DNA损伤率≤0.5‰
自由基清除能力检测:
  • DPPH清除率:IC50≤0.15mg/ml
  • 羟自由基清除:抑制率≥85%(Fenton反应体系)
  • 超氧阴离子清除:速率常数≥1.2×10⁴L/mol/s
氧化还原状态检测:
  • GSH/GSSG比值:≥10:1
  • NADP+/NADPH平衡:还原当量≥0.8
  • 硫巴比妥酸反应物:吸光度值≤0.25(532nm)
线粒体功能检测:
  • 复合体Ⅰ活性:≥50nmol/min/mgprot
  • 膜电位变化:ΔΨm衰减率≤15%
  • ROS生成速率:≤200RFU/min(DCFH-DA探针)
炎症因子关联检测:
  • TNF-α表达量:≤20pg/ml
  • IL-6浓度:≤15pg/ml(ELISA法)
细胞凋亡标志物:
  • Caspase-3活性:≤1.5OD405/min/mg
  • Bax/Bcl-2比值:≤0.8
能量代谢参数:
  • ATP含量:≥25nmol/mgprot
  • 乳酸脱氢酶泄漏:释放率≤18%
基因表达分析:
  • Nrf2转录水平:上调倍数≥2.5
  • HO-1mRNA表达:Ct值≤28
功能性指标:
  • 冠脉流量维持度:≥基线值85%
  • 心肌收缩力恢复:dP/dtmax下降率≤20%

检测范围

1.离体心肌组织灌流模型:Langendorff或WorkingHeart装置制备样本,重点监测再灌注期自由基爆发峰值

2.心肌细胞悬液体系:原代心肌细胞或H9c2细胞系,评估抗氧化物胞内渗透效率

3.缺血再灌注损伤模型:30min缺血/120min再灌注标准流程,检测预处理药物保护效应

4.心肌保护液添加剂:含组氨酸/色氨酸的晶体液,验证自由基捕获能力

5.心脏移植保存液:UW液或HTK液改良配方,测定低温储存期氧化损伤累积

6.心肌缺血预适应模型:反复短暂缺血处理样本,分析内源性抗氧化激活阈值

7.药物心脏毒性评价:蒽环类化疗药物处理标本,量化自由基介导损伤路径

8.人工心脏辅助装置:体外循环管路接触材料,检测机械应力诱导氧化产物

9.基因修饰心肌组织:SOD过表达转基因模型,验证酶活性增强幅度

10.心肌梗死边缘区样本:缺血区周边组织切片,定位区域特异性氧化损伤梯度

检测方法

国际标准:

  • ISO21427-1:2020细胞遗传学试验——哺乳动物细胞微核试验
  • AACC86-40.01超氧化物歧化酶活性分光光度法
  • OECD489体外哺乳动物细胞微核试验
国家标准:
  • GB/T21746-2023医药工业洁净室(区)悬浮粒子测试方法
  • GB/T39429-2020超氧化物歧化酶活性检测抑制型法
  • YY/T1217-2020医疗器械生物学评价遗传毒性试验
(差异说明:ISO21427-1要求37℃±0.5℃精确温控,GB/T39429-2020允许±1℃偏差;AACC法规定340nm波长检测,对应国标采用550nm改良法)

检测设备

1.离体心脏灌流系统:HugoSachsEHPS-1000型(压力范围0-200cmH₂O,流量精度±0.1ml/min)

2.多功能酶标仪:ThermoFisherVarioskanLUX(波长范围200-1000nm,检测限0.01OD)

3.高效液相色谱仪:Agilent1260InfinityII(C18反相柱,UV检测器精度±1nm)

4.荧光分光光度计:HitachiF-7100(激发波长200-750nm,狭缝宽度0.2-5nm可调)

5.电子顺磁共振谱仪:BrukerEMXmicro(X波段频率9.8GHz,灵敏度10¹¹spins/G)

6.激光共聚焦显微镜:LeicaTCSSP8(405/488/561/633nm四激光线,分辨率120nm)

7.超微量分光光度计:NanoDropOneC(检测体积0.3-2μl,波长精度±1nm)

8.气相色谱质谱联用仪:ShimadzuGCMS-QP2020NX(EI离子源,质量范围m/z1.5-1090)

9.全自动生化分析仪:MindrayBS-2000M(温度控制37±0.3℃,交叉污染率≤0.1%)

10.细胞能量代谢分析仪:AgilentSeahorseXFe96(氧耗速率检测精度±15pmol/min)

11.实时荧光定量PCR仪:Bio-RadCFXOpus96(温控精度±0.1℃,动态范围10¹⁰)

12.流式细胞仪:BeckmanCytoFLEXS(检测灵敏度<100MESF,流速1-120μl/min)

13.生物发光检测系统:PromegaGloMaxDiscover(动态范围8个数量级,温控±0.5℃)

14.微量热泳动仪:NanoTemperMonolithNT.115(温度范围15-40℃,样品量4μl)

15.超速离心机:BeckmanOptimaMAX-XP(最大转速150,000rpm,温控±0.5℃)

北京中科光析科学技术研究所【简称:中析研究所】

报告:可出具第三方检测报告(电子版/纸质版)。

检测周期:7~15工作日,可加急。

资质:旗下实验室可出具CMA/CNAS资质报告。

标准测试:严格按国标/行标/企标/国际标准检测。

非标测试:支持定制化试验方案。

售后:报告终身可查,工程师1v1服务。

心脏灌流自由基清除能力分析
中析研究所

北京中科光析科学技术研究所(简称中析研究所),隶属于北京前沿科学技术研究院,为集体所有制单位,是以科研检测为主的科学技术研究机构。中析研究所坚持基础研究与应用研究并重、应用研究和技术转化相结合,发展为以“任务带学科”为主要特色的综合性研究所。经国家有关部门批准,成为第三方分析测试技术服务单位,旗下实验室机构获得CMA资质认证。开展了研发设计、分析检测、试验验证、共性加工、信息及知识产权等服务,为科技型企业创新提供公共服务。本所得到政府创新基金的支持,被评为国家高新技术企业。

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