树种DNA条形码检测
因您的需求、实验方案、检测样品、测试过程不同,相应的参考标准请咨询在线工程师!
文章概述:树种DNA条形码检测技术基于分子生物学原理,利用标准化DNA片段(如JianCe、matK、rbcL基因)进行物种鉴定。核心检测对象为木质材料或活体组织的DNA序列,关键项目包括DNA提取纯度(A260/A280≥1.8)、PCR扩增效率(≥95%)、序列比对准确度(相似度≥98%)及物种匹配率(参照BOLD系统)。该方法实现快速、高精度树种识别,适用于木材溯源和濒危物种保护。
检测项目
DNA提取质量控制:
- 提取效率:DNA产量(≥50ng/μl),纯度指标(A260/A280≥1.8,参照QIAGEN手册)
- 完整性检测:DNA降解率(≤5%,凝胶电泳评估)
- 扩增效率:目标片段扩增率(≥95%),非特异性扩增控制(引物二聚体≤1%)
- 产物浓度:扩增产物浓度(20-100ng/μl,参照ThermoFisher协议)
- 序列长度:目标基因片段长度(JianCe:600-700bp,matK:800-900bp)
- 读序质量:碱基错误率(≤0.1%,Q30≥90%)
- 序列比对:BLAST相似度(≥98%),数据库覆盖率(参照BOLD系统)
- 进化树构建:分支支持率(bootstrap≥70%,MEGA软件标准)
- 种内变异:序列差异度(≤2%),种间区分度(≥10%)
- 引物特异性:交叉反应率(≤5%,多重PCR验证)
- 外源DNA检测:污染阈值(≤1个异源序列/百万读序)
- 试剂空白测试:阴性对照通过率(100%)
- 重复性测试:批内变异系数(CV≤5%)
- 标准品验证:参考物质匹配率(≥99%)
- 降解样品处理:PCR扩增成功率(≥80%,陈旧样本)
- 抑制剂耐受:扩增抑制率(≤10%,腐殖酸干扰测试)
- 并行样本量:单批次处理数(≥96样本)
- 自动化程度:手工干预率(≤5%)
- 鉴定置信度:置信水平(≥95%)
- 数据完整性:缺失值率(≤1%)
检测范围
1.针叶树材:涵盖松科、柏科等木质材料,重点检测生长轮DNA变异及地理溯源准确性
2.阔叶树材:如橡木、枫木等硬木,侧重物种混杂鉴别和心材边材DNA一致性
3.濒危保护树种:如红豆杉、沉香木,检测重点为微量DNA提取成功率及非法贸易鉴定
4.进口木材制品:包括家具、地板等成品,核心检测海关合规性及原产地DNA匹配
5.混合木质材料:如复合板、纸浆,侧重多物种DNA分离及成分占比分析
6.活体植株组织:叶片、根茎样本,检测重点为快速现场鉴定及病原干扰排除
7.古代木材样本:考古木质遗存,核心检测DNA降解补偿及年代校准准确性
8.森林生态样本:混交林木材,重点评估生物多样性指数及共生物种识别
9.幼苗及种子:育苗材料,检测重点为遗传纯度及杂交变异常规筛查
10.木质包装材料:如托盘、箱子,侧重检疫性害虫DNA残留及国际标准符合性
检测方法
国际标准:
- ISPM31:2008木质包装材料处理准则(DNA提取参照附录)
- CBOLPlantWorkingGroup:2011植物DNA条形码操作指南(JianCe/rbcL标准片段)
- ISO17025:2017测试实验室能力要求(数据验证流程)
- GB/T35818-2018林木种质资源DNA条形码检测技术规程(PCR扩增参数)
- LY/T2347-2014木材物种鉴定方法(序列比对阈值)
- GB/T16550-2020植物检疫取样方法(降解样本处理差异)
检测设备
1.组织研磨仪:MixerMillMM400型(频率30Hz,处理量24样本/批次)
2.核酸提取仪:KingFisherFlex型(通量96孔板,提取效率≥99%)
3.PCR扩增仪:Veriti96-Well型(温控精度±0.1°C,升温速率6°C/s)
4.电泳系统:Bio-RadGelDocXR+型(分辨率1bp,紫外检测波长302nm)
5.微量分光光度计:NanoDropOne型(检测范围2-15000ng/μl,精度±1%)
6.高通量测序仪:IlluminaMiSeq型(读长2×300bp,通量25Mreads/run)
7.生物分析仪:Agilent2100型(DNA完整性评分,灵敏度0.1ng/μl)
8.离心机:Eppendorf5430R型(转速15000rpm,温控范围-10°C至40°C)
9.恒温混匀仪:ThermoMixerC型(振荡频率300-1400rpm,温度范围4°C-99°C)
10.自动化移液平台:HamiltonSTARlet型(精度±1%,通量384孔板)
11.冷冻干燥机:ChristAlpha2-4型(真空度0.001mbar,样品容量4kg)
12.超低温冰箱:ThermoScientific-80°C型(温度稳定性±1°C,容积700L)
13.无菌操作台:EscoAirstream型(风速0.45m/s,洁净度Class100)
14.序列分析工作站:CLCGenomicsWorkbench型(处理速度100GB/hr,多序列比对算法)
15.实时荧光定量PCR仪:QuantStudio7型(动态范围10^7,检测通道6色)
北京中科光析科学技术研究所【简称:中析研究所】
报告:可出具第三方检测报告(电子版/纸质版)。
检测周期:7~15工作日,可加急。
资质:旗下实验室可出具CMA/CNAS资质报告。
标准测试:严格按国标/行标/企标/国际标准检测。
非标测试:支持定制化试验方案。
售后:报告终身可查,工程师1v1服务。