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树种DNA条形码检测

因您的需求、实验方案、检测样品、测试过程不同,相应的参考标准请咨询在线工程师!

文章概述:树种DNA条形码检测技术基于分子生物学原理,利用标准化DNA片段(如JianCe、matK、rbcL基因)进行物种鉴定。核心检测对象为木质材料或活体组织的DNA序列,关键项目包括DNA提取纯度(A260/A280≥1.8)、PCR扩增效率(≥95%)、序列比对准确度(相似度≥98%)及物种匹配率(参照BOLD系统)。该方法实现快速、高精度树种识别,适用于木材溯源和濒危物种保护。

检测项目

DNA提取质量控制:

  • 提取效率:DNA产量(≥50ng/μl),纯度指标(A260/A280≥1.8,参照QIAGEN手册)
  • 完整性检测:DNA降解率(≤5%,凝胶电泳评估)
PCR扩增参数:
  • 扩增效率:目标片段扩增率(≥95%),非特异性扩增控制(引物二聚体≤1%)
  • 产物浓度:扩增产物浓度(20-100ng/μl,参照ThermoFisher协议)
测序准确度评估:
  • 序列长度:目标基因片段长度(JianCe:600-700bp,matK:800-900bp)
  • 读序质量:碱基错误率(≤0.1%,Q30≥90%)
物种鉴定分析:
  • 序列比对:BLAST相似度(≥98%),数据库覆盖率(参照BOLD系统)
  • 进化树构建:分支支持率(bootstrap≥70%,MEGA软件标准)
条形码特异性验证:
  • 种内变异:序列差异度(≤2%),种间区分度(≥10%)
  • 引物特异性:交叉反应率(≤5%,多重PCR验证)
样品污染控制:
  • 外源DNA检测:污染阈值(≤1个异源序列/百万读序)
  • 试剂空白测试:阴性对照通过率(100%)
数据可靠性校验:
  • 重复性测试:批内变异系数(CV≤5%)
  • 标准品验证:参考物质匹配率(≥99%)
环境适应性评估:
  • 降解样品处理:PCR扩增成功率(≥80%,陈旧样本)
  • 抑制剂耐受:扩增抑制率(≤10%,腐殖酸干扰测试)
高通量处理能力:
  • 并行样本量:单批次处理数(≥96样本)
  • 自动化程度:手工干预率(≤5%)
报告生成标准:
  • 鉴定置信度:置信水平(≥95%)
  • 数据完整性:缺失值率(≤1%)

检测范围

1.针叶树材:涵盖松科、柏科等木质材料,重点检测生长轮DNA变异及地理溯源准确性

2.阔叶树材:如橡木、枫木等硬木,侧重物种混杂鉴别和心材边材DNA一致性

3.濒危保护树种:如红豆杉、沉香木,检测重点为微量DNA提取成功率及非法贸易鉴定

4.进口木材制品:包括家具、地板等成品,核心检测海关合规性及原产地DNA匹配

5.混合木质材料:如复合板、纸浆,侧重多物种DNA分离及成分占比分析

6.活体植株组织:叶片、根茎样本,检测重点为快速现场鉴定及病原干扰排除

7.古代木材样本:考古木质遗存,核心检测DNA降解补偿及年代校准准确性

8.森林生态样本:混交林木材,重点评估生物多样性指数及共生物种识别

9.幼苗及种子:育苗材料,检测重点为遗传纯度及杂交变异常规筛查

10.木质包装材料:如托盘、箱子,侧重检疫性害虫DNA残留及国际标准符合性

检测方法

国际标准:

  • ISPM31:2008木质包装材料处理准则(DNA提取参照附录)
  • CBOLPlantWorkingGroup:2011植物DNA条形码操作指南(JianCe/rbcL标准片段)
  • ISO17025:2017测试实验室能力要求(数据验证流程)
国家标准:
  • GB/T35818-2018林木种质资源DNA条形码检测技术规程(PCR扩增参数)
  • LY/T2347-2014木材物种鉴定方法(序列比对阈值)
  • GB/T16550-2020植物检疫取样方法(降解样本处理差异)
方法差异说明:国际标准如CBOL侧重多基因组合,而GB/T35818强调单一基因(如matK)主导;ISO17025要求数据追溯链,GB标准简化现场应用;ISPM31针对检疫样本,LY/T2347涵盖非破坏性提取。

检测设备

1.组织研磨仪:MixerMillMM400型(频率30Hz,处理量24样本/批次)

2.核酸提取仪:KingFisherFlex型(通量96孔板,提取效率≥99%)

3.PCR扩增仪:Veriti96-Well型(温控精度±0.1°C,升温速率6°C/s)

4.电泳系统:Bio-RadGelDocXR+型(分辨率1bp,紫外检测波长302nm)

5.微量分光光度计:NanoDropOne型(检测范围2-15000ng/μl,精度±1%)

6.高通量测序仪:IlluminaMiSeq型(读长2×300bp,通量25Mreads/run)

7.生物分析仪:Agilent2100型(DNA完整性评分,灵敏度0.1ng/μl)

8.离心机:Eppendorf5430R型(转速15000rpm,温控范围-10°C至40°C)

9.恒温混匀仪:ThermoMixerC型(振荡频率300-1400rpm,温度范围4°C-99°C)

10.自动化移液平台:HamiltonSTARlet型(精度±1%,通量384孔板)

11.冷冻干燥机:ChristAlpha2-4型(真空度0.001mbar,样品容量4kg)

12.超低温冰箱:ThermoScientific-80°C型(温度稳定性±1°C,容积700L)

13.无菌操作台:EscoAirstream型(风速0.45m/s,洁净度Class100)

14.序列分析工作站:CLCGenomicsWorkbench型(处理速度100GB/hr,多序列比对算法)

15.实时荧光定量PCR仪:QuantStudio7型(动态范围10^7,检测通道6色)

北京中科光析科学技术研究所【简称:中析研究所】

报告:可出具第三方检测报告(电子版/纸质版)。

检测周期:7~15工作日,可加急。

资质:旗下实验室可出具CMA/CNAS资质报告。

标准测试:严格按国标/行标/企标/国际标准检测。

非标测试:支持定制化试验方案。

售后:报告终身可查,工程师1v1服务。

树种DNA条形码检测
中析研究所

北京中科光析科学技术研究所(简称中析研究所),隶属于北京前沿科学技术研究院,为集体所有制单位,是以科研检测为主的科学技术研究机构。中析研究所坚持基础研究与应用研究并重、应用研究和技术转化相结合,发展为以“任务带学科”为主要特色的综合性研究所。经国家有关部门批准,成为第三方分析测试技术服务单位,旗下实验室机构获得CMA资质认证。开展了研发设计、分析检测、试验验证、共性加工、信息及知识产权等服务,为科技型企业创新提供公共服务。本所得到政府创新基金的支持,被评为国家高新技术企业。

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