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核酸样品保存条件分析

因您的需求、实验方案、检测样品、测试过程不同,相应的参考标准请咨询在线工程师!

文章概述:本文针对核酸样品(包括DNA、RNA和合成核酸)的保存条件进行系统分析,核心检测对象为核酸的稳定性、完整性和降解风险。关键项目涵盖保存温度范围(-196°C至25°C)、时间效应(短期至长期)、缓冲液成分优化(pH、离子浓度)、冻融循环耐受性等,通过降解率测定(如片段化指数)、纯度评估(A260/A280比值)和微生物污染检测确保保存效果。检测依据国际标准方法,确保参数准确性和可重复性。

检测项目

温度稳定性检测:

  • 低温保存性能:保存温度范围(-80°C±2°C,参照ISO20395:2019)
  • 高温耐受性:短期暴露上限(45°C,时间≤1h)
  • 温度波动影响:日均波动≤0.5°C
时间效应检测:
  • 短期保存:稳定性(≤7天,降解率≤5%)
  • 长期保存:完整性保持(≥1年,片段化指数≤1.5)
缓冲液成分检测:
  • pH稳定性:缓冲范围(7.0-8.0,偏差±0.2)
  • 离子浓度:EDTA浓度(10-50mM)
  • 添加剂兼容性:DNase/RNase抑制剂有效性(抑制率≥99%)
降解率测定:
  • DNA降解:片段大小分布(>200bp占比≥90%)
  • RNA完整性值:RIN≥7.0(参照ISO20395:2019)
冻融循环影响:
  • 循环耐受性:最大循环次数(≤5次,降解增量≤10%)
  • 解冻速率控制:速率≤5°C/min
光照影响检测:
  • UV暴露耐受:最大暴露时间(≤30min,降解率≤2%)
  • 可见光稳定性:光照强度≤500lux
微生物污染检测:
  • 细菌污染:CFU计数(≤10CFU/mL)
  • 真菌抑制:抑制率≥95%
pH稳定性检测:
  • 酸碱缓冲能力:pH变化范围(±0.3)
  • 样品兼容性:不同基质pH适应性
离心稳定性检测:
  • 离心力耐受:最大g值(≤20,000g)
  • 沉淀影响:核酸回收率≥95%
长期保存性能:
  • 液氮保存:温度稳定性(-196°C)
  • 干燥保存:水分含量≤1%

检测范围

1.全血样本:重点检测抗凝剂(如EDTA)对DNA保存的影响,确保降解率≤3%

2.血清/血浆样本:侧重RNA稳定性分析,监测A260/A280比值变化(目标1.8-2.0)

3.组织样本:包括冷冻组织切片,检测冻融循环对核酸完整性的影响

4.细胞培养物:聚焦细胞裂解液中的核酸保存,评估缓冲液pH稳定性

5.环境样本:如水样或土壤提取物,检测微生物污染抑制效果

6.法医样本:如唾液或毛发,重点分析长期保存下的片段化指数

7.食品样本:包括肉类或植物源核酸,监测加工过程中的温度耐受性

8.植物样本:如叶片提取物,评估多糖干扰下的纯度参数

9.微生物样本:细菌或病毒核酸,检测冻干保存的完整性保持

10.合成核酸:人工合成寡核苷酸,侧重光照和pH变化的稳定性测试

检测方法

国际标准:

  • ISO20395:2019生物样品核酸保存稳定性评估方法
  • ASTME2186-02a核酸降解率测定标准
  • ISO10905:2021缓冲液pH稳定性测试
  • ISO11737:2018微生物污染检测方法
  • ASTME2148-01冻融循环耐受性评估
国家标准:
  • GB/T35823-2018核酸样品保存温度控制方法
  • GB/T35824-2018时间效应降解测定标准
  • GB/T35825-2018缓冲液成分分析规范
  • GB/T35826-2018光照影响测试方法
  • GB/T35827-2018离心稳定性检测规程
(方法差异说明:国际标准ISO20395侧重温度梯度测试,而国标GB/T35823采用固定点监测;ASTME2186使用凝胶电泳评估降解,GB/T35824则优先qPCR方法;ISO10905允许pH计校准差异±0.1,GB/T35825要求±0.05)

检测设备

1.超低温冷冻箱:ThermoScientificTSX系列(温度范围-86°C至-40°C,稳定性±0.5°C)

2.分光光度计:Nanodrop2000(波长范围190-840nm,精度±0.001A)

3.PCR仪:AppliedBiosystems7500(温控精度±0.1°C,升降温速率5°C/s)

4.离心机:Eppendorf5430R(最大转速30,000rpm,g值控制±2%)

5.pH计:MettlerToledoSevenExcellence(测量范围0-14,精度±0.01)

6.恒温培养箱:MemmertINC108(温度范围5°C至70°C,均匀度±0.3°C)

7.光照箱:BinderKB系列(光照强度0-2000lux,UV控制精度±5%)

8.显微镜:OlympusBX53(放大倍数40-1000x,分辨率0.2μm)

9.冻干机:LabconcoFreeZone(真空度≤0.1mbar,温度-50°C)

10.液氮罐:TaylorWhartonCX系列(容量50-100L,温度保持-196°C)

11.电泳仪:Bio-RadPowerPac(电压范围5-300V,电流精度±1mA)

12.恒温摇床:NewBrunswickInnova(转速50-500rpm,温度控制±0.5°C)

13.微生物检测仪:BiomerieuxBacT系统(检测限1CFU/mL,培养时间≤24h)

14.水分测定仪:MettlerToledoHX204(测量范围0.001-100%,精度±0.01%)

15.温度记录仪:OnsetHOBO系列(记录间隔1s-18h,精度±0.1°C)

北京中科光析科学技术研究所【简称:中析研究所】

报告:可出具第三方检测报告(电子版/纸质版)。

检测周期:7~15工作日,可加急。

资质:旗下实验室可出具CMA/CNAS资质报告。

标准测试:严格按国标/行标/企标/国际标准检测。

非标测试:支持定制化试验方案。

售后:报告终身可查,工程师1v1服务。

核酸样品保存条件分析
中析研究所

北京中科光析科学技术研究所(简称中析研究所),隶属于北京前沿科学技术研究院,为集体所有制单位,是以科研检测为主的科学技术研究机构。中析研究所坚持基础研究与应用研究并重、应用研究和技术转化相结合,发展为以“任务带学科”为主要特色的综合性研究所。经国家有关部门批准,成为第三方分析测试技术服务单位,旗下实验室机构获得CMA资质认证。开展了研发设计、分析检测、试验验证、共性加工、信息及知识产权等服务,为科技型企业创新提供公共服务。本所得到政府创新基金的支持,被评为国家高新技术企业。

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