核酸样品保存条件分析
因您的需求、实验方案、检测样品、测试过程不同,相应的参考标准请咨询在线工程师!
文章概述:本文针对核酸样品(包括DNA、RNA和合成核酸)的保存条件进行系统分析,核心检测对象为核酸的稳定性、完整性和降解风险。关键项目涵盖保存温度范围(-196°C至25°C)、时间效应(短期至长期)、缓冲液成分优化(pH、离子浓度)、冻融循环耐受性等,通过降解率测定(如片段化指数)、纯度评估(A260/A280比值)和微生物污染检测确保保存效果。检测依据国际标准方法,确保参数准确性和可重复性。
检测项目
温度稳定性检测:
- 低温保存性能:保存温度范围(-80°C±2°C,参照ISO20395:2019)
- 高温耐受性:短期暴露上限(45°C,时间≤1h)
- 温度波动影响:日均波动≤0.5°C
- 短期保存:稳定性(≤7天,降解率≤5%)
- 长期保存:完整性保持(≥1年,片段化指数≤1.5)
- pH稳定性:缓冲范围(7.0-8.0,偏差±0.2)
- 离子浓度:EDTA浓度(10-50mM)
- 添加剂兼容性:DNase/RNase抑制剂有效性(抑制率≥99%)
- DNA降解:片段大小分布(>200bp占比≥90%)
- RNA完整性值:RIN≥7.0(参照ISO20395:2019)
- 循环耐受性:最大循环次数(≤5次,降解增量≤10%)
- 解冻速率控制:速率≤5°C/min
- UV暴露耐受:最大暴露时间(≤30min,降解率≤2%)
- 可见光稳定性:光照强度≤500lux
- 细菌污染:CFU计数(≤10CFU/mL)
- 真菌抑制:抑制率≥95%
- 酸碱缓冲能力:pH变化范围(±0.3)
- 样品兼容性:不同基质pH适应性
- 离心力耐受:最大g值(≤20,000g)
- 沉淀影响:核酸回收率≥95%
- 液氮保存:温度稳定性(-196°C)
- 干燥保存:水分含量≤1%
检测范围
1.全血样本:重点检测抗凝剂(如EDTA)对DNA保存的影响,确保降解率≤3%
2.血清/血浆样本:侧重RNA稳定性分析,监测A260/A280比值变化(目标1.8-2.0)
3.组织样本:包括冷冻组织切片,检测冻融循环对核酸完整性的影响
4.细胞培养物:聚焦细胞裂解液中的核酸保存,评估缓冲液pH稳定性
5.环境样本:如水样或土壤提取物,检测微生物污染抑制效果
6.法医样本:如唾液或毛发,重点分析长期保存下的片段化指数
7.食品样本:包括肉类或植物源核酸,监测加工过程中的温度耐受性
8.植物样本:如叶片提取物,评估多糖干扰下的纯度参数
9.微生物样本:细菌或病毒核酸,检测冻干保存的完整性保持
10.合成核酸:人工合成寡核苷酸,侧重光照和pH变化的稳定性测试
检测方法
国际标准:
- ISO20395:2019生物样品核酸保存稳定性评估方法
- ASTME2186-02a核酸降解率测定标准
- ISO10905:2021缓冲液pH稳定性测试
- ISO11737:2018微生物污染检测方法
- ASTME2148-01冻融循环耐受性评估
- GB/T35823-2018核酸样品保存温度控制方法
- GB/T35824-2018时间效应降解测定标准
- GB/T35825-2018缓冲液成分分析规范
- GB/T35826-2018光照影响测试方法
- GB/T35827-2018离心稳定性检测规程
检测设备
1.超低温冷冻箱:ThermoScientificTSX系列(温度范围-86°C至-40°C,稳定性±0.5°C)
2.分光光度计:Nanodrop2000(波长范围190-840nm,精度±0.001A)
3.PCR仪:AppliedBiosystems7500(温控精度±0.1°C,升降温速率5°C/s)
4.离心机:Eppendorf5430R(最大转速30,000rpm,g值控制±2%)
5.pH计:MettlerToledoSevenExcellence(测量范围0-14,精度±0.01)
6.恒温培养箱:MemmertINC108(温度范围5°C至70°C,均匀度±0.3°C)
7.光照箱:BinderKB系列(光照强度0-2000lux,UV控制精度±5%)
8.显微镜:OlympusBX53(放大倍数40-1000x,分辨率0.2μm)
9.冻干机:LabconcoFreeZone(真空度≤0.1mbar,温度-50°C)
10.液氮罐:TaylorWhartonCX系列(容量50-100L,温度保持-196°C)
11.电泳仪:Bio-RadPowerPac(电压范围5-300V,电流精度±1mA)
12.恒温摇床:NewBrunswickInnova(转速50-500rpm,温度控制±0.5°C)
13.微生物检测仪:BiomerieuxBacT系统(检测限1CFU/mL,培养时间≤24h)
14.水分测定仪:MettlerToledoHX204(测量范围0.001-100%,精度±0.01%)
15.温度记录仪:OnsetHOBO系列(记录间隔1s-18h,精度±0.1°C)
北京中科光析科学技术研究所【简称:中析研究所】
报告:可出具第三方检测报告(电子版/纸质版)。
检测周期:7~15工作日,可加急。
资质:旗下实验室可出具CMA/CNAS资质报告。
标准测试:严格按国标/行标/企标/国际标准检测。
非标测试:支持定制化试验方案。
售后:报告终身可查,工程师1v1服务。