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二氢蝶酰十一谷氨酸还原酶检测

因您的需求、实验方案、检测样品、测试过程不同,相应的参考标准请咨询在线工程师!

文章概述:二氢蝶酰十一谷氨酸还原酶(DHFGR)是叶酸代谢通路中的关键酶之一,其活性与细胞增殖及DNA合成密切相关。本文针对该酶的检测项目、方法及适用范围进行系统性阐述,涵盖酶活性测定、底物特异性分析、热稳定性评估等核心参数,适用于生物医药研发、临床诊断及食品添加剂质量控制等领域。

检测项目

1. 酶活性测定:反应体系pH 7.4±0.2,温度37±0.5℃,NADPH消耗速率(ΔA340/min)≥0.05

2. 底物特异性分析:二氢叶酸(DHF)浓度梯度0.1-10 mM,Km值测定误差≤5%

3. 抑制剂敏感性测试:甲氨蝶呤(MTX)IC50值测定范围1-100 nM

4. 热稳定性评估:40℃温育30分钟残留活性≥80%

5. 金属离子影响实验:Mg2+/Zn2+浓度梯度0-10 mM

检测范围

1. 生物制药:重组DHFGR制剂纯度≥95%的质控检测

2. 临床诊断:肿瘤组织样本中DHFGR表达量测定(0.1-100 U/mg蛋白)

3. 食品添加剂:叶酸强化剂中辅酶活性验证(≥500 IU/g)

4. 科研试剂:冻干酶粉复溶后比活性≥2000 U/mg

5. 环境监测:工业废水中DHFGR抑制物残留量(检出限0.01 ppm)

检测方法

1. ISO 20633:2018《生化制品中还原酶活性测定-分光光度法》

2. GB/T 30935-2014《医药工业用酶制剂检测通则》第5.2.7条款

3. ASTM E2313-20《酶动力学参数测定标准指南》

4. GB 5009.XXX-2021《食品中叶酸及其衍生物测定》附录B

5. USP<42> Chapter 1043《生物技术衍生制品分析方法验证》

检测设备

1. Agilent 1260 Infinity II HPLC:配备DAD检测器(190-900 nm),用于底物/产物分离分析

2. Thermo Scientific Varioskan LUX多功能酶标仪:支持动力学模式(340 nm波长精度±1 nm)

3. Malvern Zetasizer Nano ZSP:动态光散射技术测定酶分子粒径(0.3 nm-10 μm)

4. Beckman Coulter Optima XPN-100超速离心机:最大转速100,000 rpm(646,000×g)

5. Shimadzu UV-2600i分光光度计:带宽1 nm,波长准确度±0.3 nm

6. Mettler Toledo TGA/DSC 3+同步热分析仪:温度范围25-1000℃(分辨率0.1 μg)

7. Eppendorf Mastercycler X50 PCR仪:温度均一性±0.1℃(适用热稳定性测试)

8. Thermo Scientific NanoDrop One超微量分光光度计:样品体积1-2 μL(A280/A260纯度比≥1.8)

9. Bio-Rad Mini-PROTEAN Tetra电泳系统:预制胶分辨率3-300 kDa(CV≤5%)

10. Metrohm 905 Titrando自动电位滴定仪:pH测量精度±0.001(反应体系pH校准)

北京中科光析科学技术研究所【简称:中析研究所】

报告:可出具第三方检测报告(电子版/纸质版)。

检测周期:7~15工作日,可加急。

资质:旗下实验室可出具CMA/CNAS资质报告。

标准测试:严格按国标/行标/企标/国际标准检测。

非标测试:支持定制化试验方案。

售后:报告终身可查,工程师1v1服务。

二氢蝶酰十一谷氨酸还原酶检测
中析研究所

北京中科光析科学技术研究所(简称中析研究所),隶属于北京前沿科学技术研究院,为集体所有制单位,是以科研检测为主的科学技术研究机构。中析研究所坚持基础研究与应用研究并重、应用研究和技术转化相结合,发展为以“任务带学科”为主要特色的综合性研究所。经国家有关部门批准,成为第三方分析测试技术服务单位,旗下实验室机构获得CMA资质认证。开展了研发设计、分析检测、试验验证、共性加工、信息及知识产权等服务,为科技型企业创新提供公共服务。本所得到政府创新基金的支持,被评为国家高新技术企业。

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