检测项目

表达分析检测：

• circRNA测序：测序深度≥50Mreads（参照ENCODE标准），表达量差异倍数≥2倍
• qPCR验证：Ct值≤35（p<0.05），内参基因GAPDH稳定性要求SD≤0.5
• 微阵列杂交：探针特异性≥95%，检测限0.01fmol/µl

功能验证检测：

• 敲除/过表达实验：敲除效率≥80%（参照CRISPR-Cas9指南），过表达倍数≥5倍
• 功能挽救试验：表型恢复率≥70%，细胞存活率≥90%
• 荧光报告基因：荧光强度变化≥50%（p<0.01）

分子机制检测：

• RNA结合蛋白互作：结合亲和力Kd≤10nM（参照EMSA标准），互作位点验证率≥95%
• 信号通路分析：通路活性变化≥30%（p<0.05），磷酸化水平检测误差≤5%
• 甲基化状态：甲基化程度差异≥10%（BS-seq方法）

细胞表型检测：

• 凋亡评估：凋亡率≤15%（AnnexinV/PI法），caspase活性变化≥2倍
• 代谢活性：ATP含量≥1.5nmol/mg蛋白（MTT法），耗氧率差异≥20%
• 增殖能力：增殖指数≥1.2（BrdU法），细胞周期G1/S期比例≥60%

电生理检测：

• 动作电位：时程变化≥10ms（膜片钳技术），复极90%时间误差≤5ms
• 离子电流：钠电流密度≥100pA/pF（电压钳法），钙瞬变幅度≥20%
• 传导速度：≥0.5m/s（多电极阵列），异位搏动发生率≤5%

疾病模型检测：

• 缺血再灌注损伤：损伤面积≤30%（TTC染色），circRNA表达变化≥3倍
• 心肌肥大：细胞面积增大≥20%（显微测量），ANP表达≥2倍
• 心律失常：室颤阈值≥10V（电刺激法），QT间期延长≥20ms

药物响应检测：

• 药效评估：IC50值≤10µM（剂量响应曲线），EC50误差≤10%
• 毒性测试：细胞毒性LD50≥100µM（CCK-8法），半数抑制浓度精确度±5%
• 协同作用：协同指数CI≤0.8（Chou-Talalay法）

代谢检测：

• 糖酵解速率：乳酸产量≥2倍（Seahorse分析），氧消耗率变化≥15%
• 脂质代谢：甘油三酯含量≤0.5mg/mg蛋白（酶法），FFA水平差异≥25%
• 氧化应激：ROS水平≤1.5倍（DCFH-DA法），SOD活性≥80U/mg

生物信息分析：

• circRNA数据库比对：同源性≥90%（CircBase参考），预测准确率≥95%
• 网络互作建模：互作节点≥50（Cytoscape分析），富集分析p值≤0.01
• 变异检测：SNP检出率≥99%（GATK流程），插入缺失长度≤5bp

组织学检测：

• 免疫组化：染色强度≥2+（DAB法），阳性细胞比例≥60%
• 原位杂交：信号噪声比≥5:1（探针特异性≥98%），定位准确率≥95%
• 超微结构：线粒体损伤评分≤2（TEM观察），肌节排列紊乱度≤10%

检测范围

1.大鼠原代心肌细胞：采用Langendorff灌流系统分离，检测重点为circRNA在缺血再灌注损伤中的表达调控及凋亡机制

2.小鼠心肌细胞系：如HL-1细胞，聚焦于circRNA在心肌肥大模型中的功能验证及信号通路交互

3.人心肌细胞系：如AC16细胞，检测重点为circRNA在心律失常模型中的电生理参数变化及药物响应

4.心肌组织切片：源自灌流心脏，检测重点为circRNA空间分布与组织病理学关联，包括纤维化区域表达差异

5.诱导多能干细胞来源心肌细胞：iPSC分化细胞，检测重点为circRNA在发育过程中的动态变化及疾病建模能力

6.心肌梗死模型组织：手术诱导样本，检测重点为circRNA在梗死边缘区的修复功能及代谢活性调控

7.心肌肥大细胞模型：血管紧张素II诱导，检测重点为circRNA表达与肥厚表型的相关性及分子机制

8.心律失常细胞模型：药物或基因修饰，检测重点为circRNA对离子通道功能的调节及传导速度影响

9.药物处理心肌细胞：如β受体阻滞剂暴露，检测重点为circRNA介导的药效动力学及毒性阈值

10.转基因动物心肌：circRNA过表达或敲除模型，检测重点为表型特异性及在心力衰竭中的功能验证

检测方法

国际标准：

• ISO20186-3:2021分子诊断中RNA测序方法（测序深度要求≥30Mreads）
• EN12687:2020细胞功能验证实验指南（敲除效率标准≥75%）
• NCBISRA标准：RNA-seq数据提交规范（数据质量控制Q30≥80%）

国家标准：

• GB/T37876-2019生物样本RNA提取方法（提取纯度A260/A280≥1.8）
• YY/T1573-2017心肌细胞电生理检测规程（动作电位记录精度±2ms）
• GB/T35823-2018细胞凋亡检测技术规范（AnnexinV阳性率误差≤5%）

国际标准侧重高通量测序和通用性，如ISO标准强调测序深度；国家标准注重具体操作参数，如GB/T标准规定RNA纯度指标更严格，但两者在功能验证实验均要求可重复性p<0.05。

检测设备

1.心脏灌流系统：Langendorff装置（流量范围1-10ml/min，温度控制±0.5°C）

2.高通量测序仪：IlluminaNovaSeq6000（通量最高6Tb/run，读取长度2×150bp）

3.实时荧光定量PCR仪：Bio-RadCFX96（检测通道6个，温度精度±0.1°C）

4.膜片钳系统：AxonMultiClamp700B（电流分辨率0.1pA，采样率100kHz）

5.流式细胞仪：BDFACSAriaIII（激光波长488nm，检测速率25,000细胞/秒）

6.细胞培养箱：ThermoScientificHeracell150i（CO2控制±0.1%，湿度≥95%）

7.荧光显微镜：ZeissLSM880（分辨率0.2µm，共聚焦深度5µm）

8.生物分析仪：Agilent2100Bioanalyzer（RNA完整性数RIN≥8.0）

9.多功能酶标仪：TecanInfiniteM200（吸光度范围0-4OD，检测波长200-1000nm）

10.离心机：EppendorfCentrifuge5430R（转速范围100-30,000rpm，容量4×100ml）

11.超低温冰箱：ThermoScientificForma900系列（温度-80°C±5°C，容积900L）

12.电生理记录仪：MolecularDevicesAxonDigidata1550B（采样率1MHz，噪声<5µV）

13.Westernblot系统：Bio-RadTrans-BlotTurbo（转印时间≤7min，膜孔径0.2µm）

14.代谢分析仪：SeahorseXFe96（耗氧率检测精度±5%，通量96孔）

15.超速离心机：BeckmanCoulterOptimaXPN-80（最大离心力802,000g，转子容量8×50ml）

北京中科光析科学技术研究所【简称：中析研究所】

报告：可出具第三方检测报告(电子版/纸质版)。

检测周期：7~15工作日，可加急。

资质：旗下实验室可出具CMA/CNAS资质报告。

标准测试：严格按国标/行标/企标/国际标准检测。

非标测试：支持定制化试验方案。

售后：报告终身可查，工程师1v1服务。