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DNA损伤程度分析

因您的需求、实验方案、检测样品、测试过程不同,相应的参考标准请咨询在线工程师!

文章概述:DNA损伤程度分析专注于量化基因组完整性受损指标,核心检测对象包括DNA链断裂、碱基氧化修饰、交联结构及突变频率。关键项目涵盖彗星电泳尾矩百分比、8-羟基脱氧鸟苷浓度、γH2AX焦点数量、片段化指数和修复酶活性,采用荧光检测、色谱分析、PCR及测序技术。分析适用于毒理学研究、环境监测和临床诊断,确保高灵敏度和特异性,提供遗传毒性评估和修复机制洞察。

检测项目

氧化损伤检测:

  • 8-羟基脱氧鸟苷含量:浓度≥0.1ng/μgDNA(参照ISO19238)
  • 脂质过氧化物关联损伤:MDA-DNA加合物水平(如:≤5adducts/10^6nucleotides)
链断裂检测:
  • 彗星assay尾矩:尾矩百分比≤5%(参照ASTME2186)
  • DNA片段化指数:DFI值(如:≤10%片段化)
碱基修饰检测:
  • 甲基化状态:CpG岛甲基化率(如:±5%偏差)
  • 脱氨基损伤:尿嘧啶含量(参照ISO20184)
交联检测:
  • 链间交联程度:交联指数(如:≤0.1crosslinks/10^6bp)
  • 蛋白质-DNA交联:SDS可溶性分数(如:≥90%未交联)
复制错误检测:
  • 微卫星不稳定性:MSI评分(如:≤10%instability)
  • 点突变频率:突变率/10^6bases(参照GB/T16886.12)
端粒长度检测:
  • 平均端粒长度:kbperchromosome(如:5-15kb范围)
  • 端粒酶活性:TRAPassayunits(如:≥0.1U/10^6cells)
染色体畸变检测:
  • 姐妹染色单体交换:SCE频率(如:≤10exchanges/cell)
  • 染色体断裂:断裂点计数(参照ISO21427)
氧化应激标志物:
  • 活性氧物种水平:ROS荧光强度(如:≤100RFU)
  • 抗氧化酶活性:SODunits/mgprotein(如:≥20U/mg)
DNA修复能力:
  • 核苷酸切除修复效率:修复率%(如:≥80%in24h)
  • 碱基切除修复活性:APsitecleavage(参照ASTME2186)
表观遗传变化:
  • 组蛋白修饰:H3K9me3level(如:±2%change)
  • DNA甲基化模式:全局甲基化%(如:5-10%range)

检测范围

1.人类血液DNA:重点检测环境暴露和疾病相关氧化损伤及链断裂,适用于生物监测和健康风险评估。

2.动物组织DNA:用于毒理学测试,侧重致癌物诱导的突变、交联和染色体畸变,支持安全评价。

3.植物基因组DNA:检测农药和重金属诱导损伤,关注碱基修饰和氧化应激标志物,用于农业安全。

4.微生物DNA:评估抗菌剂和污染物毒性,重点分析复制错误和修复能力,应用于环境微生物学。

5.古DNA样本:分析降解损伤和污染,侧重片段化指数和脱氨基变化,用于考古和进化研究。

6.细胞系DNA:体外实验控制培养条件影响,检测端粒长度和表观遗传变化,支持细胞生物学研究。

7.法医DNA样本:检测降解、污染和突变,重点评估链断裂和微卫星不稳定性,用于身份鉴定。

8.环境DNA(eDNA):监测污染物效应,关注氧化损伤和碱基修饰,应用于生态毒理学。

9.临床活检样本:癌症相关DNA损伤分析,侧重γH2AX焦点和修复效率,用于诊断和治疗监测。

10.食品中DNA:检测加工induceddamage,重点评估交联和氧化标志物,确保食品安全。

检测方法

国际标准:

  • ISO19238:2014DNA损伤与修复检测指南
  • ASTME2186-02a单细胞凝胶电泳(彗星assay)方法
  • ISO20184:2018分子生物学检测中的DNA修饰分析
  • ISO21427:2006体外微核试验用于遗传毒性评估
国家标准:
  • GB/T5009.215-2020食品中DNA损伤检测方法
  • GB/T16886.12-2021医疗器械遗传毒性试验
  • GB/T37871-2019环境DNA检测技术规范
  • GB/T39129-2020细胞DNA氧化损伤测定法
方法差异说明:ISO标准通常强调样本预处理和国际化验证,而GB标准注重国内临床应用和食品安全要求,例如在彗星assay中,ISO指定电泳条件为碱性pH,GB可能调整缓冲液配方以适应本地样本类型;在氧化损伤检测中,ISO使用HPLC-MS参考方法,GB可能集成荧光检测以降低成本。

检测设备

1.实时荧光定量PCR仪:ABI7500型(动态范围1-10^9拷贝,精度±0.1Cq)

2.流式细胞仪:BDFACSCalibur(488nm激光,FL1-FL4检测通道)

3.液相色谱-质谱联用仪:Agilent6495CQQQ(质量精度<2ppm,扫描速度50Hz)

4.彗星assay成像系统:CometScoreII(图像分析软件,尾矩计算分辨率0.1像素)

5.微孔板读数器:BioTekSynergyH1(波长范围200-999nm,温控精度±0.1°C)

6.DNA测序仪:IlluminaNovaSeq6000(通量最高6Tb/run,读长2x150bp)

7.离心机:Eppendorf5417R(最大转速17,000rpm,温度范围-10°Cto40°C)

8.电泳系统:Bio-RadPowerPacBasic(电压范围10-300V,电流上限2A)

9.显微镜:OlympusBX53(荧光模块,100x油镜,NA1.4)

10.紫外分光光度计:NanoDropOne(样本体积1-2μL,波长精度±1nm)

11.恒温培养箱:MemmertIN75(温度范围室温+5°Cto70°C,均匀性±0.5°C)

12.超低温冰箱:ThermoScientificForma900系列(-86°C存储,容量700L)

13.生物安全柜:LabconcoPurifierLogic+(ClassII,TypeA2,气流速度0.5m/s)

14.自动核酸提取仪:QiagenQIAcube(处理样本数1-12,提取效率≥95%)

15.凝胶成像系统:SyngeneG:BOX(CCD相机,16-bit灰度,分辨率4.2MP)

北京中科光析科学技术研究所【简称:中析研究所】

报告:可出具第三方检测报告(电子版/纸质版)。

检测周期:7~15工作日,可加急。

资质:旗下实验室可出具CMA/CNAS资质报告。

标准测试:严格按国标/行标/企标/国际标准检测。

非标测试:支持定制化试验方案。

售后:报告终身可查,工程师1v1服务。

DNA损伤程度分析
中析研究所

北京中科光析科学技术研究所(简称中析研究所),隶属于北京前沿科学技术研究院,为集体所有制单位,是以科研检测为主的科学技术研究机构。中析研究所坚持基础研究与应用研究并重、应用研究和技术转化相结合,发展为以“任务带学科”为主要特色的综合性研究所。经国家有关部门批准,成为第三方分析测试技术服务单位,旗下实验室机构获得CMA资质认证。开展了研发设计、分析检测、试验验证、共性加工、信息及知识产权等服务,为科技型企业创新提供公共服务。本所得到政府创新基金的支持,被评为国家高新技术企业。

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