细胞重金属毒性指南检测
检测项目
细胞活力检测:
- 细胞存活率:IC50值(MTT法参照ISO10993-5)
- 增殖抑制率:ED50值(≥95%置信区间)
- 克隆形成能力:集落数(直径≥50μm)
- 铅浓度:检出限≤0.1ppb(ICP-MS参照EPA6020B)
- 汞含量:回收率85%-115%(冷原子吸收法)
- 镉离子:线性范围0.5-100μg/L
- MDA含量:μmol/mg蛋白(TBA法参照GB/T5009.181)
- SOD活性:U/mg蛋白(WST-1法)
- GSH水平:nmol/mg蛋白(DTNB法)
- 凋亡率:AnnexinV阳性比例(流式细胞术)
- caspase-3活性:RFU/min(荧光底物法)
- DNA片段化:梯状条带强度(凝胶电泳)
- MT1AmRNA:相对表达量(qPCR参照MIQE指南)
- HSP70水平:foldchange≥2(RT-qPCR)
- 抗氧化基因:SOD2表达量(Ct值差异)
- 差异蛋白:丰度变化(2D凝胶电泳)
- 磷酸化状态:磷酸位点数(质谱法)
- 蛋白互作:结合常数KD(SPR技术)
- LDH释放量:U/L(比色法参照ISO10993-5)
- ATP水平:nmol/10^6细胞(荧光法)
- 乳酸产量:mmol/L(酶电极法)
- G2/M期比例:百分比(PI染色流式术)
- S期指数:BrdU阳性率
- 有丝分裂阻滞:微核形成数(≥3个/细胞)
- IL-6浓度:pg/mL(ELISA参照GB/T34798)
- TNF-α水平:ng/mL(多因子阵列)
- NF-κB活化:核转位率(免疫荧光)
- LDH漏出率:%对照(比色法)
- 膜电位变化:荧光强度比(JC-1染色)
- 渗透性:PI阳性细胞比例
检测范围
1.人类肝细胞系:检测重金属对肝脏代谢的影响,重点评估细胞色素P450活性和谷胱甘肽耗竭。
2.人类肾细胞系:关注重金属诱导的肾小管损伤,侧重检测氧化应激和凋亡指标。
3.小鼠胚胎成纤维细胞:评估发育毒性,重点分析细胞周期阻滞和基因突变频率。
4.鱼类鳃细胞培养物:检测水环境重金属污染,侧重膜完整性和离子通道功能。
5.植物根尖细胞:用于土壤污染评估,重点检测重金属积累和光合作用抑制。
6.环境水样中浮游细胞:监测水质毒性,侧重存活率和代谢活性变化。
7.食品样本中肠道细胞模型:评估重金属残留风险,重点检测炎症因子和屏障功能。
8.医疗器械接触细胞:针对医用材料溶出物,侧重细胞毒性和基因表达异常。
9.化妆品成分测试细胞:用于安全性评价,重点分析氧化应激和凋亡率。
10.药物筛选原代细胞:评估重金属解毒剂效果,侧重代谢组学和蛋白互作。
检测方法
国际标准:
- ISO10993-5医疗器械生物学评价第5部分:细胞毒性试验
- OECDTG455体外细胞基因突变试验方法
- EPA6020B电感耦合等离子体质谱法测定痕量元素
- ISO21427-1水质-体外微核试验
- ISO19040-1水质-细胞毒性测试指南
- GB/T16886.5医疗器械生物学评价第5部分:细胞毒性试验
- GB/T5009.181食品中丙二醛的测定
- GB/T34798细胞因子检测方法
- GB/T5750.6生活饮用水标准检验方法重金属部分
- GB/T15441水质急性毒性测定方法
检测设备
1.倒置显微镜:NikonEclipseTi2(分辨率0.2μm,放大倍率40-400X)
2.流式细胞仪:BDFACSAriaIII(检测通道18个,流速12μL/s)
3.电感耦合等离子体质谱仪:Agilent7900(检出限≤0.1ppb,质量范围3-270amu)
4.原子吸收光谱仪:PerkinElmerPinAAcle900T(石墨炉温度3000℃,精度±0.5%)
5.荧光显微镜:OlympusBX53(激发波长365-640nm,CCD灵敏度0.01lux)
6.实时荧光定量PCR仪:Bio-RadCFX96(温控精度±0.1℃,通道数6)
7.酶标仪:ThermoMultiskanSky(波长范围340-850nm,孔间差≤1%)
8.细胞培养箱:ThermoScientificHeracellVIOS(CO2控制5±0.2%,温度37±0.5℃)
9.超低温冰箱:EppendorfCryoCubeF740(温度-86℃,容积740L)
10.离心机:Eppendorf5430R(转速30,000rpm,容量4x100mL)
11.生物安全柜:BakerSG403(气流速度0.5m/s,过滤效率99.99%)
12.分光光度计:ShimadzuUV-2600(波长精度±0.5nm,带宽1nm)
13.高效液相色谱仪:WatersACQUITYUPLC(压力上限18,000psi,流速0.001-5mL/min)
14.基因测序仪:IlluminaNovaSeq6000(通量20Breads/run,错误率≤0.1%)
15.细胞计数仪:CountstarIC1000(计数范围10^4-10^7/mL,精度±2%)
北京中科光析科学技术研究所【简称:中析研究所】
报告:可出具第三方检测报告(电子版/纸质版)。
检测周期:7~15工作日,可加急。
资质:旗下实验室可出具CMA/CNAS资质报告。
标准测试:严格按国标/行标/企标/国际标准检测。
非标测试:支持定制化试验方案。
售后:报告终身可查,工程师1v1服务。