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有益菌落总数平板计数实验

检测项目

样品预处理:

  • 均质处理:均质转速12000rpm±5%(参照ISO6887-1)
  • 稀释液验证:缓冲蛋白胨水pH7.2±0.2,渗透压300±15mOsm/kg
梯度稀释:
  • 稀释度梯度:10⁻¹至10⁻⁶(连续稀释误差≤5%)
  • 移液精度:移液器校准误差≤1μL(ISO8655-2)
培养基制备:
  • 选择性琼脂:MRS琼脂灭菌后pH6.2±0.2(适用乳杆菌)
  • 培养基性能:目标菌回收率≥70%(参照ISO11133)
平板接种:
  • 涂布体积:0.1mL±0.02mL(GB4789.2附录B)
  • 倾注温度:琼脂冷却至46℃±1℃
培养控制:
  • 温度稳定性:36±0.5℃(ANSI/NSF49认证)
  • 气体环境:厌氧罐氧浓度≤0.1%(ISO15213)
菌落计数:
  • 计数阈值:30-300CFU/平板(FDABAMChap.3)
  • 形态确认:革兰氏染色阳性率≥95%(ISO19344)
数据计算:
  • 结果修约:<100CFU保留整数,≥100CFU两位有效数字
  • 不确定度:扩展不确定度≤0.35log₁₀CFU(EURACHEL指南)
干扰消除:
  • 抑制剂中和:胆盐浓度0.15%±0.02%(针对肠道样品)
  • 竞争菌抑制:叠氮化钠添加量0.03g/L(ISO15214)
质控验证:
  • 阳性对照:植物乳杆菌ATCC8014回收率80-120%
  • 阴性对照:无菌平板零生长(ISO7218)
设备校准:
  • 培养箱验证:温度均匀性±0.3℃(NIST可溯源)
  • 天平精度:±0.001g(量程0-220g)

检测范围

1.发酵乳制品:酸奶、酸奶油等,重点检测保加利亚乳杆菌与嗜热链球菌比例

2.益生菌制剂:冻干菌粉/胶囊,侧重活菌稳定性及包埋率验证

3.婴幼儿配方食品:添加双歧杆菌产品,需检测阪崎肠杆菌干扰

4.发酵植物基产品:豆乳发酵制品,检测植物乳杆菌特异性生长

5.保健食品:片剂/口服液,关注肠球菌属选择性计数

6.发酵肉制品:萨拉米香肠等,检测清酒乳杆菌耐盐性

7.饲料添加剂:枯草芽孢杆菌制剂,验证孢子萌发率

8.化妆品原料:发酵产物滤液,需排除杂菌污染

9.药品原料:益生菌原菌种,符合USP<2022>无菌要求

10.环境样本:发酵车间拭子,监控设备表面菌群定植

检测方法

国际标准:

  • ISO19344:2015发酵乳制品中乳酸菌计数(IDF220)
  • ISO15214:1998食品微生物学-厌氧菌平板计数法
  • FDABAMChapter3:酸奶中乳酸菌检测
国家标准:
  • GB4789.35-2022食品微生物学检验乳酸菌检验
  • GB/T4789.34-2023双歧杆菌检验
  • SN/T5364.8-2021出口益生菌产品检测规程
方法差异说明:ISO标准要求双层平板法提高厌氧环境完整性,GB方法允许单层倾注但需延长培养时间至72h;FDABAM规定双歧杆菌检测须补充半胱氨酸-HCl溶液,而ISO方法采用预还原培养基。

检测设备

1.无菌均质器:BagMixer400型(拍击速度8次/秒,均质袋爆破强度≥50N)

2.程控稀释仪:Dilumate8400(梯度稀释误差≤1%,交叉污染率<0.1%)

3.自动涂布机:EddyJet2(涂布半径误差≤0.5mm,速度可调5-60rpm)

4.厌氧培养系统:WhitleyA35(氧浓度监测精度0.01%,CO₂调控范围5-15%)

5.恒温培养箱:MemmertIPP260(温度波动±0.2℃,独立三区校准)

6.菌落计数器:Scan500(分辨率4μm,误判率<0.5%)

7.微生物鉴定仪:VITEKMS(质谱检测范围200-2000Da)

8.PCR仪:QuantStudio7(控温速率6℃/秒,孔间温差±0.2℃)

9.生物安全柜:EscoAirstream4(下降风速0.33±0.015m/s,HEPA过滤效率99.999%)

10.移液器校准仪:SartoriusCubisMCA(测量范围1μL‑10mL,精度±0.1%)

11.pH计:MettlerToledoSevenExcellence(分辨率0.001pH,自动温度补偿)

12.超纯水系统:Milli-QIQ7003(电阻率18.2MΩ·cm,TOC≤1ppb)

13.培养基分装器:Sterilmixer300(分装精度±1mL/min,温度保持46±0.5℃)

14.菌落成像系统:ProtoCOL3(RGB三色LED光源,600dpi分辨率)

15.厌氧指示剂:AnaeroGen2.5L(氧吸收率>99.9%,有效期24个月)

北京中科光析科学技术研究所【简称:中析研究所】

报告:可出具第三方检测报告(电子版/纸质版)。

检测周期:7~15工作日,可加急。

资质:旗下实验室可出具CMA/CNAS资质报告。

标准测试:严格按国标/行标/企标/国际标准检测。

非标测试:支持定制化试验方案。

售后:报告终身可查,工程师1v1服务。

有益菌落总数平板计数实验
其他检测

中析研究所可进行各种检测分析服务,包括不限于:标准试验,非标检测,分析测试,认证设计,产品验收,质量内控,矢量分析,内部控制,司法鉴定等。可出具合法合规、具有公信力的第三方检测报告。