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心脏灌流心肌细胞铁死亡检测

检测项目

铁代谢指标:

  • 铁离子浓度:游离铁(Fe^{2+},参照ISO17294)、铁蛋白含量(μg/mL)
  • 转铁蛋白饱和度:饱和率(%)、未饱和铁结合能力(μmol/L)
氧化应激指标:
  • 谷胱甘肽水平:还原型谷胱甘肽(GSH,μM)、氧化型谷胱甘肽(GSSG,μM)
  • 活性氧物质:超氧阴离子(O_2^-,nmol/min/mg)、过氧化氢(H_2O_2,μM)
脂质过氧化产物:
  • 丙二醛含量:MDA(nmol/mg,参照GB/T5009.181)
  • 4-羟基壬烯醛:HNE(ng/mL)
细胞死亡标志物:
  • 铁死亡特异性基因:GPX4表达量(foldchange)、ACSL4活性(U/mg)
  • 凋亡相关蛋白:Caspase-3活性(%)、Bcl-2/Bax比值
细胞活力评估:
  • 细胞存活率:MTT法(OD值≥0.8)、LDH释放量(U/L)
  • 膜完整性:台盼蓝排斥率(%)、钙离子内流(nM)
形态学变化:
  • 线粒体结构:线粒体肿胀指数、嵴断裂评分(0-5级)
  • 细胞核形态:核固缩率(%)、染色质凝聚度
基因表达分析:
  • 铁死亡通路基因:SLC7A11表达量(foldchange)、FTH1mRNA水平
  • 调控因子:Nrf2激活状态(%)、p53磷酸化水平
蛋白质组学指标:
  • 关键蛋白检测:Ferritin含量(μg/mL)、Transferrin受体密度
  • 磷酸化状态:p-ERK/p-JNK比值、p-AKT活性
代谢物检测:
  • 脂质代谢物:磷脂酰乙醇胺含量(μg/mg)、胆固醇酯化率(%)
  • 能量代谢:ATP水平(μmol/g)、乳酸产生量(mM)
炎症因子:
  • 细胞因子:IL-6浓度(pg/mL)、TNF-α水平(pg/mL)
  • 趋化因子:MCP-1表达量(foldchange)

检测范围

1.离体大鼠心脏灌流模型:模拟缺血再灌注损伤,重点检测铁死亡诱导的脂质过氧化和细胞活力变化

2.人心肌细胞原代培养:针对药物毒性研究,侧重铁离子代谢失衡和基因表达异常

3.小鼠心脏组织切片:用于病理模型分析,检测形态学损伤和氧化应激标志物

4.干细胞分化心肌细胞:评估再生医学应用,重点监控铁死亡相关蛋白表达和代谢功能

5.心脏器官芯片模型:微流体环境下检测细胞死亡动态,侧重实时铁离子波动和膜完整性

6.心肌缺血模型:模拟缺氧条件,检测谷胱甘肽耗竭和活性氧积累

7.药物干预样本:抗铁死亡化合物测试,重点分析基因调控因子和细胞存活率

8.转基因动物心脏:特定基因敲除或过表达,检测铁死亡通路变异和炎症反应

9.临床活检组织:人类心脏疾病样本,侧重丙二醛含量和线粒体结构损伤

10.体外共培养系统:心肌细胞与成纤维细胞互作,检测铁死亡传播和细胞因子释放

检测方法

国际标准:

  • ISO10993-5:2009医疗器械生物学评价细胞毒性试验
  • ISO17294-2:2016水质电感耦合等离子体质谱法金属元素测定
  • ISO17025:2017检测和校准实验室能力通用要求
国家标准:
  • GB/T16886.5-2017医疗器械生物学评价细胞毒性试验
  • GB/T5009.181-2003食品中丙二醛的测定
  • GB/T27404-2008实验室质量控制规范分子生物学检测
方法差异说明:国际标准ISO10993-5采用直接接触法评估细胞毒性,而国家标准GB/T16886.5强调间接提取物测试;ISO17294规定电感耦合等离子体质谱法检测金属元素,GB/T5009.181基于分光光度法测定丙二醛,灵敏度差异为0.1μMvs0.5μM;ISO17025要求实验室管理体系,GB/T27404侧重分子检测质量控制流程。

检测设备

1.分光光度计:ThermoScientificNanoDrop2000(波长范围190-840nm,分辨率0.1nm)

2.流式细胞仪:BDFACSCalibur(激光波长488nm,检测通道6个)

3.荧光显微镜:OlympusIX83(物镜放大倍数100x,CCD分辨率5MP)

4.实时PCR仪:AppliedBiosystemsQuantStudio5(热循环温度范围4-99°C,通量96孔)

5.高效液相色谱仪:Agilent1260InfinityII(流速范围0.001-10mL/min,检测限0.01ng)

6.电感耦合等离子体质谱仪:PerkinElmerNexION350D(元素检测范围Li-U,精度±0.1ppb)

7.细胞培养箱:ThermoScientificHeracell150i(温度控制37±0.5°C,CO_2浓度5%)

8.酶标仪:BioTekSynergyH1(检测模式吸光/荧光/发光,波长范围200-1000nm)

9.透射电子显微镜:JEOLJEM-1400(加速电压80kV,分辨率0.2nm)

10.气相色谱仪:ShimadzuGC-2010Plus(载气流速0.1-10mL/min,检测器FID)

11.超速离心机:BeckmanCoulterOptimaXPN-100(转速范围0-100,000rpm,温度控制-10-40°C)

12.微孔板洗涤器:BioTekELx405(洗涤通道8个,精度±1μL)

13.细胞计数仪:CountessIIFL(荧光检测通道3个,样本体积20μL)

14.电生理记录系统:MolecularDevicesAxonAxopatch200B(电压钳范围±200mV,采样率100kHz)

15.低温存储箱:EppendorfCryoCubeF240(温度范围-150°C至-80°C,容量240L)

北京中科光析科学技术研究所【简称:中析研究所】

报告:可出具第三方检测报告(电子版/纸质版)。

检测周期:7~15工作日,可加急。

资质:旗下实验室可出具CMA/CNAS资质报告。

标准测试:严格按国标/行标/企标/国际标准检测。

非标测试:支持定制化试验方案。

售后:报告终身可查,工程师1v1服务。

心脏灌流心肌细胞铁死亡检测
其他检测

中析研究所可进行各种检测分析服务,包括不限于:标准试验,非标检测,分析测试,认证设计,产品验收,质量内控,矢量分析,内部控制,司法鉴定等。可出具合法合规、具有公信力的第三方检测报告。