检测项目

样本采集与处理：

• 样本体积要求：≥2ml脑脊液（参照WHO标准）
• 离心参数：离心力3000g、时间15min（温度4°C）
• 样本时效性：处理前≤24h存储（4°C恒温）

涂片制备：

• 涂片厚度：均匀覆盖玻片（厚度≤0.1mm）
• 干燥方法：自然风干≥30min或加热板45°C（时间≤5min）

染色技术：

• 抗酸染色：Ziehl-Neelsen法（石炭酸品红浓度5%、脱色酸浓度3%）
• 荧光染色：金胺O法（金胺浓度0.1%、脱色剂乙醇浓度70%）
• 染色时间：抗酸染色加热5min、荧光染色室温10min

显微镜检查：

• 放大倍率：1000×油镜（物镜100×/目镜10×）
• 视野计数：最小100视野/玻片（检出限≥1bacillus/100视野）
• 聚焦精度：景深调节≤2μm

杆菌形态判读：

• 形态特征：直杆状长度1-4μm、宽度0.2-0.5μm（抗酸阳性≥90%）
• 染色特性：红色抗酸杆菌（Ziehl-Neelsen）或黄色荧光（金胺O）

结果分级报告：

• 定量标准：1+（1-9bacilli/100视野）、2+（10-99bacilli/100视野）（参照IUATLD指南）
• 临界值判读：阴性（0bacilli）、阳性（≥1bacillus）

质量控制：

• 阴性对照：无菌盐水涂片（无杆菌检出率100%）
• 阳性对照：结核杆菌标准株涂片（检出率≥95%）
• 重复性测试：同一样本涂片双盲检查（一致性≥90%）

灵敏度评估：

• 检测限：≥10000bacilli/mL（假阴性率≤5%）
• 样本稀释测试：稀释度1:10至1:100（回收率≥85%）

特异性控制：

• 非结核排除：形态学区分其他分枝杆菌（如MAC菌，长度差异≥20%）
• 假阳性率：<5%（通过背景染色控制）

样本保存与运输：

• 存储条件：4°C恒温（时效≤72h）
• 运输参数：保温箱温度2-8°C、振动控制≤5g）

数据记录：

• 玻片编号：唯一标识码（格式LabID-YYYYMMDD）
• 图像存档：分辨率≥5MP、存储格式JPG

检测范围

1.腰椎穿刺脑脊液：常规诊断样本，重点检测结核杆菌浓度及形态完整性，强调离心浓缩后涂片均匀性。

2.脑室引流脑脊液：术后或重症患者样本，侧重高蛋白背景下杆菌检出率，需额外脱脂处理。

3.新生儿脑脊液：低体积样本（≥0.5ml），检测重点为最小检出限控制，避免假阴性。

4.免疫低下患者脑脊液：HIV或化疗患者样本，核心关注杆菌负载量动态变化，强化荧光染色灵敏度。

5.疑似结核性脑膜炎脑脊液：急性感染样本，侧重快速涂片制备和分级报告，时效性≤2h处理。

6.治疗后随访脑脊液：抗结核药物干预后样本，重点监测杆菌数量减少趋势，需重复涂片对比。

7.冷冻保存脑脊液：-80°C冻存样本，检测重点为解冻后形态恢复率，避免冰晶损伤。

8.稀释脑脊液：蛋白含量<100mg/dL样本，核心评估离心效率及涂片吸附力，参数优化离心力3500g。

9.污染风险样本：血性或浑浊脑脊液，侧重背景干扰控制，使用增强脱色步骤。

10.快速筛查适用样本：急诊场景脑脊液，检测重点为缩短染色时间至≤10min，确保基本形态判读。

检测方法

国际标准：

• WHOLaboratoryManualforTuberculosis2020脑脊液涂片染色与显微镜检查
• ISO15189:2022医学实验室质量要求（涵盖涂片制备精度控制）
• CLSIM48-A抗菌药敏感性测试指南（关联杆菌确认方法）

国家标准：

• GB/T20468-2022临床实验室结核杆菌检测涂片法
• GB15987-2012传染病诊断标准（脑脊液结核杆菌形态学规范）
• YY/T1247-2021微生物染色试剂通用要求（染色剂浓度校准）

方法差异说明：WHO标准优先推荐Ziehl-Neelsen抗酸染色，而GB/T20468扩展荧光法适用性；ISO15189强调实验室质量控制体系，GB标准侧重临床报告格式统一；CLSIM48-A与YY/T1247在染色剂配制上存在浓度允许偏差±5%。

检测设备

1.低温离心机：Eppendorf5804R（最大离心力30000g，转速精度±1rpm）

2.光学显微镜：OlympusBX53（油镜100×/1.25NA，目镜10×，分辨率0.2μm）

3.荧光显微镜：NikonEclipseNi-E（荧光滤镜组BP450-490，发射波长515nm）

4.加热干燥装置：Cole-ParmerDigitalHotplate（温度范围室温-300°C，精度±1°C）

5.自动染色机：SakuraTissue-TekPrisma（编程染色周期10-30min，容量50玻片）

6.生物安全柜：ThermoFisher1300SeriesA2（CLASSII，风速0.5m/s）

7.样本存储冰箱：HaierMedicalRefrigerator（温度范围2-8°C，波动±0.5°C）

8.精密计时器：VWRTraceableTimer（计时范围0-999min，精度±0.1s）

9.玻片处理架：FisherbrandSlideRack（材质不锈钢，容纳量100片）

10.pH测量仪：MettlerToledoSevenCompact（测量范围0-14pH，精度±0.01）

11.图像采集系统：LeicaDFC450Camera（分辨率5MP，接口USB3.0）

12.消毒灭菌器：SterisAutoclave（温度121°C，压力15psi，周期30min）

13.样本运输箱：ColemanPolarCooler（保温性能±2°C/24h，容积10L）

14.数据分析软件：ImageJ（图像处理插件，计数误差≤2%）

15.微量移液器：EppendorfResearchPlus（量程0.1-1000μL，精度±0.5%）

北京中科光析科学技术研究所【简称：中析研究所】

报告：可出具第三方检测报告(电子版/纸质版)。

检测周期：7~15工作日，可加急。

资质：旗下实验室可出具CMA/CNAS资质报告。

标准测试：严格按国标/行标/企标/国际标准检测。

非标测试：支持定制化试验方案。

售后：报告终身可查，工程师1v1服务。