LEA蛋白表达试验
检测项目
表达水平检测:
- RT-qPCR检测:Ct值、熔解曲线(参照SYBRGreen方法,扩增效率90-110%)
- Westernblot定量:灰度值分析、条带密度比(参照β-actin内参,动态范围0.01-10μg)
- ELISA分析:吸光度OD值、检测限(≤0.1ng/mL,参照ISO13485标准)
- SDS-PAGE检测:纯度百分比(≥95%,分辨率1kDa)
- SEC-HPLC验证:保留时间、峰对称因子(0.8-1.2,参照USP<621>色谱标准)
- 质谱鉴定:分子量偏差(±50Da,质量精度10ppm)
- 渗透保护能力:离子泄漏率(≤10%,胁迫时间24h)
- 酶活性抑制:IC50值、抑制常数(Ki,参照Michaelis-Menten方程)
- 热稳定性测试:变性温度(Tm值±1°C)
- 圆二色谱检测:α-螺旋含量、波长扫描(190-260nm)
- 荧光光谱分析:最大发射波长、量子产率(参照ISO20550标准)
- 核磁共振:化学位移、峰积分(分辨率≤0.01ppm)
- 浊度测定:NTU值(≤5NTU,缓冲液pH7.4)
- 离心沉淀率:上清蛋白回收率(≥90%,转速15000×g)
- 免疫荧光定位:荧光强度比、亚细胞定位精度(±5μm)
- Dotblot检测:斑点密度、信噪比(≥3:1)
- 加速稳定性:降解率(≤5%/月,温度37°C)
- 冻融循环:活性保留率(≥95%,循环次数3次)
- 时间过程分析:表达峰值时间(h)、半衰期(t1/2)
- 胁迫响应曲线:EC50值、斜率因子(R²≥0.99)
- 线性范围:校准曲线R²(≥0.998)
- 检出限:LOD值(3×空白SD)
- 蛋白提取效率:回收率(≥85%,参照Bradford法)
- 缓冲液兼容性:pH影响范围(6.0-8.0)
检测范围
1.转基因拟南芥幼苗:检测LEA蛋白在干旱胁迫下的表达动态变化,重点为RT-qPCR定量和胁迫响应曲线
2.水稻种子胚乳提取物:分析高温响应中的表达水平,侧重SEC-HPLC纯度检测和热稳定性测试
3.烟草细胞悬浮培养物:评估渗透胁迫保护功能性,核心为离子泄漏率测定和荧光定位
4.大肠杆菌重组表达样品:验证重组蛋白纯度和活性,覆盖SDS-PAGE分析和酶抑制IC50值
5.玉米叶片组织匀浆:量化盐胁迫响应,重点ELISA定量和Dotblot验证
6.酵母表达系统产物:检测低温适应性表达,强调圆二色谱结构分析和冻融稳定性
7.小麦根尖微透析液:监测水分缺失下的动力学,核心为时间过程分析和质谱鉴定
8.拟南芥原生质体:评估亚细胞定位精度,侧重免疫荧光和Westernblot定量
9.纯化LEA蛋白冻干粉:验证长期储存稳定性,重点加速降解率和溶解度测试
10.藻类生物反应器产物:分析光照胁迫响应,覆盖表达峰值时间测定和校准曲线线性验证
检测方法
国际标准:
- ISO10993-5:2021体外细胞毒性测试(用于功能性评估,灵敏度高)
- ISO20550:2019荧光光谱分析规范(波长精度±1nm)
- ISO13485:2016ELISA定量方法(检测限要求0.1ng/mL)
- ISO/IEC17025:2017检测实验室通用要求(涵盖重复性RSD<5%)
- GB/T37870-2019蛋白纯度检测-HPLC法(保留时间偏差≤0.1min,与国际SEC-HPLC差异在于流速控制)
- GB/T38165-2019分子生物学定量PCR标准(Ct值精度±0.5,扩增效率90-110%,与ISO差异在热循环参数)
- GB/T16886.5-2017生物相容性测试(用于渗透保护功能,离子泄漏率≤10%,比ISO更严格)
- GB/T34817-2017蛋白质稳定性加速试验(降解率≤5%/月,温度范围更宽)
检测设备
1.实时荧光定量PCR仪:QuantStudio7Pro型(温度梯度±0.1°C,通道数6)
2.紫外分光光度计:NanoDropOnec型(波长范围190-840nm,检测限0.002μg/μL)
3.高效液相色谱系统:Agilent1260InfinityII型(流速范围0.001-10mL/min,压力限800bar)
4.凝胶成像分析仪:ChemiDocMP型(分辨率20μm,动态范围4.8OD)
5.圆二色光谱仪:JascoJ-1500型(波长扫描190-260nm,精度±0.1mdeg)
6.荧光显微镜:OlympusFV3000型(物镜放大倍数60×,分辨率0.2μm)
7.多功能酶标仪:SpectraMaxi3x型(检测模式8种,波长范围230-1000nm)
8.超速离心机:BeckmanCoulterOptimaXPN型(最大转速150000rpm,温度控制±1°C)
9.质谱分析仪:ThermoQExactive型(质量精度1ppm,扫描速度12Hz)
10.恒温摇床培养箱:InforsHTMultitron型(温度范围4-80°C,振荡幅度50mm)
11.电泳系统:Bio-RadMini-PROTEAN型(电压范围10-300V,凝胶尺寸8×10cm)
12.冻干机:LabconcoFreeZone型(冷凝温度-84°C,真空度<0.1mbar)
13.渗透胁迫模拟器:Custom-BuiltChamber型(湿度控制10-90%RH,温度范围15-40°C)
14.核磁共振谱仪:BrukerAvanceNEO型(场强600MHz,分辨率0.01ppm)
15.微透析采样系统:CMA402型(流速范围0.1-5μL/min,回收率≥85%)
北京中科光析科学技术研究所【简称:中析研究所】
报告:可出具第三方检测报告(电子版/纸质版)。
检测周期:7~15工作日,可加急。
资质:旗下实验室可出具CMA/CNAS资质报告。
标准测试:严格按国标/行标/企标/国际标准检测。
非标测试:支持定制化试验方案。
售后:报告终身可查,工程师1v1服务。